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UNC1999 Histone Methyltransferase inhibidor

Name: UNC1999
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S7165
Rating: 5 (32 reviews)

Cat. No.S7165

UNC1999 es un potente inhibidor, biodisponible por vía oral y selectivo de EZH2 y EZH1 con IC50 de 2 nM y 45 nM en ensayos libres de células, respectivamente, mostrando una selectividad >1000 veces mayor sobre una amplia gama de objetivos epigenéticos y no epigenéticos. Este compuesto es un potente inductor de autophagy. Suprime específicamente H3K27me3/2 e induce una serie de efectos antileucémicos, incluyendo antiproliferación, diferenciación y apoptosis.

UNC1999 Histone Methyltransferase inhibidor Chemical Structure

Estructura química

Peso molecular: 569.74

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Control de calidad

Lote: Pureza: 99.86%

99.86

Dianas relacionadas	HDAC JAK BET PKC PARP HIF PRMT EZH2 AMPK Histone Acetyltransferase
Otros Histone Methyltransferase Inhibidores	Pinometostat (EPZ5676) 3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride BIX-01294 trihydrochloride EPZ015666 (GSK3235025) EPZ004777 MM-102 (HMTase Inhibitor IX) Chaetocin SGC 0946 EPZ005687 UNC0638

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo

Líneas celulares	Tipo de ensayo	Tiempo de incubación	Descripción de la actividad	PMID
human MCF10A cells	Function assay	72 h	Inhibition of EZH2 in human MCF10A cells assessed as reduction of H3K27me3 level after 72 hrs by Western blot analysis, IC50=0.124 μM	25406853
human MCF10A cells	Cytotoxic assay		Cytotoxicity against human MCF10A cells assessed as cell viability by Alamar Blue assay, EC50=19.2 μM	25406853
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Información química, almacenamiento y estabilidad

Peso molecular	569.74	Fórmula	C₃₃H₄₃N₇O₂	Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)	3 años-20°Cpolvo
Nº CAS	1431612-23-5	Descargar SDF		Almacenamiento de soluciones madre	1 año-80°Cen disolvente 1 mes-20°Cen disolvente
Sinónimos	N/A			Smiles	CCCC1=C(C(=O)NC(=C1)C)CNC(=O)C2=C3C=NN(C3=CC(=C2)C4=CN=C(C=C4)N5CCN(CC5)C(C)C)C(C)C

Solubilidad

In vitro
Lote:

DMSO : 100 mg/mL (175.51 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Calculadora de Molaridad

Masa	Concentración	Volumen	Peso molecular
=	×	×

Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo Lote:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, contacte con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	5.000mg/ml (8.78mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, contacte con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1.250mg/ml (2.19mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 25 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

Dosis: mg/kg Peso promedio de los animales: g Volumen de dosificación por animal:μL Número de animales:

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH₂O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción

Características	The first orally bioavailable inhibitor against wild-type and mutant EZH2 as well as EZH1.
Targets/IC₅₀/Ki	EZH2 (Cell-free assay) 2 nM EZH1 (Cell-free assay) 45 nM
In vitro	UNC1999 es altamente potente para los mutantes EZH2 Y641N y EZH2 Y641F in vitro. Este compuesto provoca reducciones de H3K27me3 dependientes de la concentración en células MCF10A con una IC50 de 124 nM, mientras que muestra baja toxicidad celular. Muestra una potente inhibición de la proliferación celular dependiente de la concentración con una EC50 de 633 nM en una línea celular de DLBCL que alberga el mutante EZH2Y641N. Además, UNC1999 biotinilado enriquece EZH2 de lisados de células HEK293T, y por lo tanto puede usarse en estudios de quimioproteómica.
Ensayo de quinasa	Ensayo de Proximidad por Centelleo
Ensayo de quinasa	Los ensayos de actividad de metiltransferasa se realizan monitoreando la incorporación de grupos metilo marcados con tritio de S-adenosilmetionina (3H-SAM) a sustratos peptídicos biotinilados usando el Ensayo de Proximidad por Centelleo (SPA) para el complejo trimérico PRC2-EZH2 (EZH2:EED:SUZ12), el complejo pentamérico PRC2-EZH1 (EZH1:EED:SUZ12:RBBP4:AEBP2), SETD7, G9a, GLP, SETDB1, SETD8, SUV420H1, SUV420H2, SUV39H2, el complejo tetramérico MLL1 (MLL:WDR5:RbBP5:ASH2L), PRMT1, PRMT3, el complejo PRMT5-MEP50 y SMYD2. El tampón de reacción para SMYD2 y SMYD3 es 50 mM Tris pH 9.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100; para G9a, GLP y SUV39H2 es 25 mM fosfato de potasio pH 8.0, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂ y 0.01% Triton X-100; y para otras HMTs 20 mM Tris pH 8.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100. Para detener las reacciones enzimáticas, se añaden 10 μL de clorhidrato de guanidina 7.5 M, seguido de 180 μL de tampón, se mezcla y se transfiere a una FlashPlate de 384 pocillos. Después de mezclar, las mezclas de reacción se incuban y los recuentos de CPM se miden usando un lector de placas Topcount. Los recuentos de CPM en ausencia de este compuesto para cada conjunto de datos se definen como 100% de actividad. En ausencia de la enzima, los recuentos de CPM en cada conjunto de datos se definen como fondo (0%). Los valores de IC50 se determinan usando concentraciones de compuesto que van desde 100 nM hasta 100 μM. Los valores de IC50 se determinan usando el software SigmaPlot. Los ensayos de EZH2-Y641F se realizan usando 30 nM de enzima en 20 mM Tris pH 8, 5 mM DTT, 0.01% Triton X-100, 5 μM SAM y 1 μM de péptido H3 (1-24) (igual que para el complejo PRC2-EZH2 de tipo salvaje). Para DNMT1, el ensayo se realiza usando dsDNA hemimetilado como sustrato. El sustrato de dsDNA se prepara por anillado de dos cadenas complementarias (cadena directa biotinilada: BGAGCCCGTAAGCCCGTTCAGGTCG y cadena inversa: CGACCTGAACGGGCTTACGGGCTC), sintetizadas por Eurofins MWG Operon. El tampón de reacción es 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5mM DTT, 0.01% Triton X-100. Los ensayos de actividad de metiltransferasa para DOT1L se realizan usando placas de filtro. Las mezclas de reacción en 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5 mM DTT, 2 mM MgCl₂ y 0.01% Triton X-100 se incuban a temperatura ambiente durante 1h, se añaden 100 μL de TCA al 10%, se mezclan y se transfieren a una placa de filtro. Las placas se centrifugan a 2000 rpm durante 2 min seguido de 2 lavados adicionales con TCA al 10% y un lavado con etanol (180 μL) seguido de centrifugación. Las placas se secan y se añaden 100 μL de MicroO y se centrifugan. Se añaden 70 μL de MicroO y se miden los CPM usando un lector de placas Topcount.
In vivo	El tratamiento con UNC1999 (150 y 50 mg/kg, i.p.) da como resultado concentraciones plasmáticas de este compuesto por encima de su IC50 celular durante 24 horas in vivo. Además, también es biodisponible por vía oral en ratones, lo que hace que los estudios crónicos en animales sean más prácticos y convenientes.
Referencias	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23614352/ [2] http://www.thesgc.org/chemical-probes/UNC1999

Aplicaciones

Métodos	Biomarcadores	PMID
Western blot	H3K27Me3 / Cleaved PARP / LC3B H3K27me2 / H3K27me1 / H3K27ac / H3K4me3 / H3K9me2 / H3K36me2	27449082
Immunofluorescence	EZH2 / H3K27me3 NF-κB	23614352
Growth inhibition assay	Cell viability	27449082

Soporte técnico

Instrucciones de manipulación

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Si tiene alguna otra consulta, por favor deje un mensaje.

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C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
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