Name: PHA-767491 HCl
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2742
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Control de calidad

Lote: Pureza: 99.96%

99.96

Dianas relacionadas	HSP PD-1/PD-L1 ROCK Wee1 DNA/RNA Synthesis Microtubule Associated Ras KRas Aurora Kinase Casein Kinase
Otros CDK Inhibidores	AS2863619 Ro-3306 SEL120 (SEL120-34A) hydrochloride INX-315 Tagtociclib (PF-07104091) PF-07220060 (CDK4/6-IN-6) AZD4573 ON123300 Enitociclib (BAY 1251152) Samuraciclib (ICEC0942) hydrochloride

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo

Líneas celulares	Tipo de ensayo	Concentración	Tiempo de incubación	Descripción de la actividad
human SF268 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SF268 cells after 72 hrs, IC50=0.86 μM
human HCT116 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT116 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=0.97 μM
human HCT16 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT16 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human SW403 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW403 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human A2780 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human A2780 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.07 μM
human SW48 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW48 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.2 μM
human MCF7 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human MCF7 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.3 μM
human U2OS cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human U2OS cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.49 μM
human COLO205 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human COLO205 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.5 μM
human OVCAR8 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human OVCAR8 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.56 μM
human L363 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human L363 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NHDF cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NHDF cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NCI-H929 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI-H929 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.8 μM
human SF539 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SF539 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.34 μM
human SW480 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SW480 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.67 μM
human NCI60 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against human NCI60 cells, IC50=3.1 μM
human Jurkat cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human Jurkat cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.2 μM
human HCT15 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT15 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.81 μM
human OPM2 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human OPM2 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=4.5 μM
human HT-29 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HT-29 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=5 μM
human K562 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human K562 cells after 72 hrs, IC50=5.87 μM
U937 cells	Function assay			Inhibition of TNFalpha production in U937 cells, IC50=19 μM
human HeLa cells	Function assay	5 μM	24 h	Induction of apoptosis in human HeLa cells assessed as appearance of PARP at 5 uM after 24 hrs
NHDF	Function assay	5 μM	16 h	Induction of cell cycle arrest in thymidine deficient NHDF assessed as DNA synthesis in S-phase at 5 uM after 16hrs FACS analysis in presence of serum
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Información química, almacenamiento y estabilidad

Peso molecular	249.7	Fórmula	C₁₂H₁₁N₃O.HCl	Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)	3 años-20°Cpolvo
Nº CAS	942425-68-5	Descargar SDF		Almacenamiento de soluciones madre	1 año-80°Cen disolvente 1 mes-20°Cen disolvente
Sinónimos	CAY10572, NMS 1116354			Smiles	C1CNC(=O)C2=C1NC(=C2)C3=CC=NC=C3.Cl

Solubilidad

In vitro
Lote:

DMSO : 24 mg/mL (96.11 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculadora de Molaridad

Masa	Concentración	Volumen	Peso molecular
=	×	×

Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo Lote:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 30%PEG300 2 2%Tween80 3 63%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, contacte con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1.000mg/ml (4.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 20 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 630 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

Dosis: mg/kg Peso promedio de los animales: g Volumen de dosificación por animal:μL Número de animales:

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH₂O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción

Características	The first inhibitor that directly affects the mechanisms controlling initiation as opposed to elongation in DNA replication.
Targets/IC₅₀/Ki	Cdc7 (Cell-free assay) 10 nM CDK9 (Cell-free assay) 34 nM GSK-3β (Cell-free assay) 220 nM CDK2 (Cell-free assay) 240 nM CDK1 (Cell-free assay) 250 nM CDK5 (Cell-free assay) 460 nM MK2 (Cell-free assay) 470 nM PLK1 (Cell-free assay) 980 nM
In vitro	PHA-767491 muestra aproximadamente 20 veces la selectividad para Cdk1, Cdk2 y GSK3-β, 50 veces la selectividad para MK2 y Cdk5 y 100 veces la selectividad para PLK1 y CHK2. PHA-767491 inhibe la proliferación celular en una variedad de líneas celulares humanas con una IC50 de 0,86 μM para SF-268 a 5,87 μM para K562, e induce significativamente la apoptosis de manera p53-independiente en casi todas las líneas celulares, en contraste con el 5-FU, que solo funciona en unas pocas líneas celulares. A diferencia de los inhibidores actuales de la síntesis de ADN, el tratamiento con PHA-767491 a 5 μM bloquea la iniciación de la replicación del ADN, pero no la progresión de la horquilla de replicación, debido a la inhibición específica de la cinasa Cdc7 y la fosforilación de Mcm2 en el sitio Ser40 dependiente de Cdc7. Los niveles elevados de Mcl-1 en células OCI-LY1 y SU-DHL-4 resistentes a ABT-737 pueden disminuirse significativamente mediante el tratamiento con PHA-767491 a 3 μM, posiblemente debido a la inhibición de Cdk9, lo que lleva a la restauración de la sensibilidad a ABT-737. El efecto pro-apoptótico directo dependiente de mitocondrias de PHA-767491 también se observa cuando se aplica a 1 μM en células quiescentes de leucemia linfocítica crónica (CLL) a través del mismo mecanismo con una EC50 de 0,34-0,97 μM. Mientras que en células CLL proliferativas estimuladas por CD154 e interleucina-4, el tratamiento con PHA-767491 a 5 μM anula la síntesis de ADN al inhibir Cdc7 en lugar de desencadenar la muerte celular.
Ensayo de quinasa	Ensayos de cinasa in vitro
Ensayo de quinasa	La inhibición de Cdc7 y CDK9 por PHA-767491 (IC50) se determina utilizando el ensayo basado en el intercambiador aniónico fuerte (resina Dowex 1-X8, forma formato). Para cada enzima, se determinan inicialmente los valores K_m absolutos para ATP y el sustrato específico, y luego cada ensayo se realiza a concentraciones optimizadas de mezcla de ATP/³³P-γ-ATP (2K_m) y sustrato (5K_m). El ensayo de la cinasa Cdc7 se realiza en un tampón que contiene 50 mM Hepes pH 7,9, 15 mM MgCl₂, 2 mM β-glicerofosfato, 0,2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, mezcla de ATP/³³P-γ-ATP 2K_m, Mcm2 5K_m (aa 10-294), 37 nM de Cdc7/Dbf4 recombinante y una concentración creciente de PHA-767491 en un volumen final de 30 μL, y se incuba durante 1 hora a 25 °C. El ensayo de la cinasa CDK9 se realiza utilizando 50 nM de Cdk9/ciclina T recombinante en 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, mezcla de ATP/³³P-γ-ATP 2K_m, péptido CDT de ARN polimerasa 5K_m y una concentración creciente de PHA-767491 en un volumen final de 30 μL, y se incuba durante 1 hora a 25 °C. Después de la incubación, se añaden 150 μL de resina/formiato (pH 3,0) para detener la reacción y capturar el ³³P-γ-ATP sin reaccionar, separándolo del sustrato fosforilado en solución. Después de 1 hora de reposo, un volumen de 50 μL de sobrenadante se transfiere a placas de 96 pocillos Optiplate. Después de la adición de 150 μL de Microscint 40, la radioactividad se cuenta en el TopCount.
In vivo	La administración de PHA-767491 dos veces al día durante 5 días inhibe significativamente el crecimiento del xenoinjerto HL60 de manera dosis-dependiente con un TGI del 50 % y 92 % a dosis de 20 mg/kg y 30 mg/kg, respectivamente, cuyo efecto también se observa en los modelos de xenoinjerto A2780, Mx-1 y HCT-116, así como en los carcinomas mamarios, y se correlaciona con la inhibición de Cdc7 y la posterior disminución de la fosforilación de Mcm2 en el sitio Ser40 dependiente de Cdc7
Referencias	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20197552/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21768328/

Aplicaciones

Métodos	Biomarcadores	Imágenes	PMID
Western blot	p-MCM2 / CDC7 RNA Pol II / p-RNA Pol II / Caspase-3 / PARP / Mcl-1 / XIAP / Bcl-xL / Bcl-2 / NOXA		24902048

Soporte técnico

Instrucciones de manipulación

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Si tiene alguna otra consulta, por favor deje un mensaje.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
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C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
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C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

PHA-767491 HCl CDK inhibidor

Estructura química

Peso molecular: 249.7