Apoptosis Activator 2 Caspase activador

Apoptosis Activator 2 (20 μM) a la concentración reducida de citocromo c aumenta la fracción de Apaf-1 en el apoptosoma en 1,5 veces hasta un 33%. Este compuesto aumenta la extensión de la activación de la caspase-3 a un nivel reducido de citocromo c y la activación de la caspase-3 en 4 veces. Induce fuertemente la activación de la caspase-3, la escisión de PARP y la fragmentación del ADN, y finalmente mata las células con un IC50 de 4 μM. Este activador induce la Apoptosis de PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 y NCI-H23 con un IC50 de 50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM y 35 μM. Ejerce un efecto citostático en la mayoría de las líneas celulares tumorales probadas, inhibiendo el crecimiento celular en un 50-100% a 10 μM en 40 de 48 líneas celulares probadas. [1] Este químico induce la muerte celular al desencadenar la formación de apoptosomas. El nivel de expresión de En1 no tiene una influencia significativa en las tasas de supervivencia de los cultivos de mesencéfalo ventral para este compuesto (-8,1 ± 6,0%). La tasa de supervivencia no se altera significativamente si se emplean los otros tres reactivos (-10,7 ± 4,7%) para este activador. [2] Este compuesto (10 μM) induce Apoptosis en células AGS según la evaluación por escalera de ADN apoptótico y el ensayo Tunel. Este (10 μM) mejora la inducción de Apoptosis por liposomas conjugados anti-TROP2. [3] La ciclohexamida (10 μg/mL) o zVAD (50 μM) protege significativamente contra la toxicidad de este químico en cultivos neuronales. Este activador (3 μM) produce numerosas neuronas con núcleos picnóticos sugestivos de muerte celular que implica Apoptosis. DHT (10 nM) o E2 (10 nM) protege significativamente contra la toxicidad de este compuesto en cultivos neuronales. [4]

Ensayo de Apoptosis sin células

Los extractos citoplasmáticos de células HeLa se preparan según informes publicados anteriormente. Apoptosis Activator 2 en DMSO se distribuyen en placas de microtitulación de 96 pocillos a una concentración final de 1 mM (la concentración final de DMSO es del 1% v/v). A cada pocillo se añaden 250 μg de proteína total de extractos citoplasmáticos en tampón HEB (50 mM Hepes, pH 7,4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl), con 2 mM DTT, 2 μM citocromo c y 0,5 μM de sustrato DEVD-AFC (Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluorometilcumarina) en un total de 150 μL. Las placas se incuban a 37 ℃ y la fluorescencia se lee en un lector de placas LJL Biosystems a intervalos de 10 minutos.