Golvatinib (E7050) c-Met inhibidor

Estudios in vitro indican que Golvatinib (E7050) inhibe potentemente la fosforilación de c-Met y VEGFR-2. También reprime potentemente el crecimiento de células tumorales amplificadas en c-Met y células endoteliales estimuladas con HGF o VEGF. [1] Este compuesto sortea la resistencia a todos los EGFR-TKIs reversibles, irreversibles y selectivos de mutantes inducida por HGF exógeno y/o endógeno en líneas celulares de cáncer de pulmón mutantes en EGFR, bloqueando la vía Met/Gab1/PI3K/Akt in vitro. También previene la aparición de células HCC827 resistentes a gefitinib inducidas por la exposición continua a HGF. [2]

Análisis de Western blot

El estado de fosforilación de c-Met y VEGFR-2 se detecta mediante análisis de Western blot. Para c-Met, las células MKN45 se incuban con una dilución en serie de Golvatinib (E7050) en medio completo a 37 °C durante 2 h. Para VEGFR-2, las HUVEC se someten a inanición con medio libre de suero endotelial humano que contiene 0,5% de FBS durante 24 h. Posteriormente, las HUVEC se incuban con una dilución en serie de este compuesto durante 1 h y luego se incuban con 20 ng/mL de VEGF humano durante 5 min. Las células se lisan con tampón de lisis (50 mM HEPES [pH 7.4], 150 mM NaCl, 10% glicerol, 1% Triton X-100, 1.5 mM MgCl₂, 1 mM EDTA [pH 8.0], 100 mM NaF, 1 mM fluoruro de fenilmetilsulfonilo, 1 mM ortovanadato de sodio, 10 μg/mL aprotinina, 50 μg/mL leupeptina y 1 μg/mL pepstatina A). Las muestras de tumor resecado se homogeneizan con tampón de lisis que contiene 25 mM de β-glicerofosfato y 0,5% (v/v) de cóctel inhibidor de fosfatasa 2 a 4 °C. Los restos celulares se eliminan por centrifugación a 17 860g durante 20 min a 4 °C. Alícuotas de los sobrenadantes que contienen 5-20 μg de proteína se someten a SDS-PAGE en condiciones reductoras. Las proteínas se transfieren luego a membranas de PVDF, bloqueadas con TBS que contiene 0,05% de Tween-20 y 5% de leche desnatada o 5% de BSA. Las membranas se sondean con los siguientes anticuerpos: anticuerpo policlonal anti-c-Met (C-28) y anticuerpo policlonal anti-VEGFR-2 (C-20); anticuerpo monoclonal anti-fosfotirosina clon 4G10; y anticuerpo policlonal anti-VEGFR-2, anticuerpo policlonal anti-fosfo-VEGFR-2 (Tyr996) y anticuerpo policlonal anti-fosfo-c-Met (Tyr1234/1235). La detección se realiza utilizando un kit de quimioluminiscencia mejorada Super Signal. Las bandas inmunorreactivas se visualizan por quimioluminiscencia con un sistema de detección Image Master-VDS-CL. La intensidad de cada banda se mide utilizando un analizador de imágenes.

Golvatinib (E7050) muestra una inhibición de la fosforilación de c-Met y VEGFR-2 en tumores in vivo, con una fuerte supresión del crecimiento tumoral y la angiogénesis en modelos de xenoinjertos. El tratamiento de algunas líneas tumorales que contienen amplificaciones de c-Met con dosis altas de este compuesto (50–200 mg/kg) induce la regresión y desaparición del tumor. En un modelo de diseminación peritoneal, demuestra un efecto antitumoral contra tumores peritoneales, así como una prolongación significativa de la vida útil en ratones tratados. [1] En otro estudio de xenoinjertos, los tumores producidos por células Ma-1 transfectadas con HGF (Ma-1/HGF) son más angiogénicos que los tumores de control del vector y muestran resistencia a ZD1839. E7050 solo inhibe la angiogénesis y retarda el crecimiento de los tumores Ma-1/HGF, y cuando se combina con ZD1839, induce una marcada regresión del crecimiento tumoral. [3]