AM1241 Cannabinoid Receptor agonista

AM-1241 es un agonista proteico del CB2 basado en el diferente efecto observado en varios ensayos (influjo de calcio, fosforilación de la quinasa regulada por señal extracelular (ERK) y medición de cAMP) y en el cambio de antagonismo neutro a agonismo en el ensayo de cAMP cuando la concentración de forskolina disminuye. En los ensayos de unión competitiva con [³H]CP 55,940, este compuesto muestra una alta afinidad por el receptor CB2 humano con un valor de K_i de aproximadamente 7 nM, mientras que su afinidad por el receptor CB1 humano es más de 80 veces más débil, utilizando preparaciones de membrana de líneas celulares estables HEK y CHO que expresan los receptores CB2 y CB1 humanos recombinantes, respectivamente. [2]

Ensayos de Unión

La unión a los receptores cannabinoides se prueba utilizando la unión de equilibrio competitivo vs. [³H]CP55,940. AM-1241 se diluye en 25 mM Tris base (pH 7,4)/5 mM MgCl₂/1 mM EDTA/0,1% BSA esencialmente libre de ácidos grasos y se transfiere a placas de 96 pocillos tratadas con Regisil. Se añade [³H]CP55,940 (DuPont_NEN; actividad específica 100–180 Ci/mmol; 1 Ci =37 GBq) a una concentración de 0,8 nM. Se añaden membranas preparadas a partir de cerebro de rata (que contienen receptores CB1) o bazo de ratón (que contienen receptores CB2) (≈50 μg de proteína de membrana por pocillo), las placas se incuban a 30 °C durante 1 hora y el contenido se filtra a través de filtros Packard Unifilter GF/B de 96 pocillos utilizando un recolector de células Packard Filtermate 196. Los filtros se lavan con 50 mM Tris base/5 mM MgCl₂/0,5% BSA helado y se secan. La radioactividad unida se cuantifica y se corrige para la unión no específica, y los resultados se normalizan entre 0% y 100% de [³H]CP-55,940 específicamente unido. La IC50 se determina mediante análisis de regresión no lineal utilizando GraphPad PRISM y se transforma a un valor de Ki. Todos los datos se recopilan por duplicado. Los valores de IC50 y Ki se determinan a partir de tres experimentos independientes.

AM-1241 revierte de forma dosis-dependiente la hipersensibilidad táctil y térmica producida por la ligadura de los nervios espinales L5 y L6 en ratas. Este compuesto también es activo en el bloqueo de la hipersensibilidad táctil y térmica inducida por la ligadura del nervio espinal en ratones que carecen de receptores CB1 (ratones CB1-/-), confirmando que revierte la hipersensibilidad sensorial independientemente de las acciones sobre los receptores CB1.[1] Este químico (100, 330 μg/kg i.p.) suprime el desarrollo de hiperalgesia térmica y mecánica y alodinia provocadas por carragenina. Y esta supresión es bloqueada por el antagonista CB2 SR144528 pero no por el antagonista CB1 SR141716A. [3] Produce antinocicepción dosis-dependiente a un estímulo térmico aplicado en la pata trasera, cuando se administra en la pata trasera del lado de la prueba (pata i.p. ipsilateral), mientras que es mucho menos activo en el lado contralateral. La A50 (dosis analgésica que produce un efecto del 50%) de este compuesto es de 847 μg/kg, alcanzándose el efecto máximo posible (100% MPE) con 3,3 mg/kg. También produce antinocicepción dosis-dependiente cuando se administra por vía intraperitoneal (i.p.), con una A50 de 103 μg/kg. Las acciones antinociceptivas de este químico son bloqueadas por el antagonista selectivo del receptor CB2 AM630, pero no por el antagonista selectivo del receptor CB1 AM251. Este compuesto no produce los efectos cannabinoides del SNC de hipotermia, catalepsia, inhibición de la actividad o alteración de la deambulación, mientras que esta tétrada de efectos es producida por el agonista mixto de los receptores CB1/CB2 WIN55,212-2.[4] Las inyecciones diarias de este químico por vía i.p., iniciadas al inicio de los síntomas, aumentan el intervalo de supervivencia después del inicio de la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) en un 56% en un modelo de ratón transgénico de ELA. [5]