AEE788 (NVP-AEE788) EGFR inhibidor

AEE788 (NVP-AEE788) también inhibe KDR, c-abl, c-Src y Flt-1 con IC50 de 50-80 nM. No es sensible a ErbB-4, PDGFR-β, Flt-3, Flt-4, RET y c-Kit y no tiene efecto inhibidor sobre Ins-R, IGF-1R, PKC-α y PKA. Este compuesto inhibe potentemente la fosforilación de EGFR en células A431 con una IC50 de 11 nM. También inhibe la fosforilación de KDR en células CHO y erbB2 en células BT-474, sin ningún efecto sobre la fosforilación inducida por PDGF en células A31. Inhibe la proliferación de células NCI-H596, MK, BT-474 y SK-BR-3 con IC50 de 78, 56, 49 y 381 nM, respectivamente. Además, tiene la propiedad adicional de inhibir la proliferación celular impulsada por el mutante de EGFR, incluidos 32D/EGFR y 32D/EGFRvIII. Además, también inhibe la proliferación de HUVEC impulsada tanto por EGF como por VEGF con IC50 de 43 y 155 nM, respectivamente. [1] Inhibe la fosforilación de EGFR, VEGFR2, Akt y MAPK en líneas celulares de carcinoma de células escamosas cutáneo humano (células Colo16, HaCaT, SRB1 y SRB12), lo que conduce a la inhibición del crecimiento y la inducción de apoptosis. [2] Inhibe la fosforilación de EGFR y Akt en células HT29 a 0,2 a 1,0 μM. [3] Inhibe la proliferación celular y previene la activación de HER1, HER2 y HER3 inducida por EGF y neurregulina en líneas celulares de meduloblastoma. Muestra actividades supresoras del crecimiento en células de meduloblastoma quimiosensibles y quimiorresistentes. [4]

Ensayos de Protein Kinase

Los ensayos de Protein Tyrosine Kinase in vitro para AEE788 (NVP-AEE788) se realizan en placas de 96 pocillos (30 μL) a temperatura ambiente durante 15–45 min utilizando los dominios quinasa recombinantes fusionados a glutatión S-transferasa (4-100 ng, dependiendo de la actividad específica). El [γ³³P]ATP se utiliza como donante de fosfato y el péptido polyGluTyr-(4:1) como aceptor. Con la excepción de la Protein Kinase C-α, la ciclina-dependiente quinasa 1/cycB y la Protein Kinase A, el sulfato de protamina (200 μg/mL), la histona H1 (100 μg/mL) y el heptapéptido Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly (conocido como Kemptide Bachem) se utilizan respectivamente como sustratos peptídicos. Los ensayos se optimizan para cada quinasa utilizando las siguientes concentraciones de ATP: 1,0 μM (c-Kit, c-Met, c-Fms, c-Raf-1 y RET), 2,0 μM (EGFR, erbB2, ErbB3 y ErbB4), 5,0 μM (c-abl), 8,0 μM (Flt-1, Flt-3, Flt-4, Flk, KDR, FGFR-1 y Tek), 10,0 μM (PDGFR-β, Protein Kinase C-α y ciclina-dependiente quinasa 1) y 20,0 μM (c-Src y Protein Kinase A). La reacción se termina con la adición de 20 μL de EDTA 125 mM. Treinta μL (c-abl, c-Src, receptor del factor de crecimiento 1 similar a la insulina, RET-Men2A y RET-Men2B) o 40 μL (todas las demás quinasas) de la mezcla de reacción se transfieren a una membrana de difluoruro de polivinilideno-Inmobilon, pre-remojada con 0,5% H3PO4 y montada en un colector de vacío. Luego se aplica el vacío y cada pocillo se enjuaga con 200 μL de H₃PO₄ al 0,5%. Las membranas se retiran y se lavan cuatro veces con H₃PO₄ al 1,0% y una vez con etanol. Las membranas secas se cuentan después de montarlas en un marco Packard TopCount de 96 pocillos y con la adición de 10 μL/pocillo de Microscint. Los valores de IC50 (±SE) se calculan mediante análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición y son promedios de al menos tres determinaciones.

AEE788 (NVP-AEE788) produce una inhibición dosis-dependiente del crecimiento tumoral en modelos de xenoinjerto NCI-H596 o DU145, con solo cambios menores en el peso corporal. Induce la regresión tumoral en un 57% a 50 mg/kg en el modelo NeuT/erbB2 GeMag e inhibe potentemente la fosforilación de EGFR inducida por EGF en tumores A431 y la fosforilación de erbB2 en tumores GeMag. Este compuesto inhibió la angiogénesis inducida por VEGF de forma dosis-dependiente y no inhibe la angiogénesis inducida por bFGF. [1] Suprime el crecimiento del volumen tumoral en un 54% en xenoinjertos Colo16 a 50 mg/kg, lo que se debe a la inhibición de la fosforilación de EGFR, VEGFR, Akt y MAPK. [2] A 50 mg/kg, también inhibe el crecimiento de tumores en el ciego y el peritoneo (>50%) y reduce la incidencia de metástasis en los ganglios linfáticos al 70% en células HT29 implantadas en el ciego de ratones nude, sin pérdida de peso corporal y evidencia macroscópica de neovascularización. Reduce significativamente los niveles de expresión de pEGFR y pVEGFR en tumores cecales HT29 y no altera los de EGF, VEGF, EGFR o VEGFR. Combinado con CPT-11, da como resultado tumores significativamente más pequeños y una inhibición completa de la metástasis en los ganglios linfáticos. [3] Este compuesto inhibe el crecimiento de xenoinjertos Daoy, DaoyPt y DaoyHER2 en un 51%, 45% y 72%, respectivamente. [4] Podría promover la generación de especies reactivas de oxígeno mediada por LBH589 en células tumorales K562, lo que a su vez aumenta la apoptosis. [5]