TAK-285 EGFR inhibidor

Entre las 34 quinasas probadas, TAK-285 solo inhibe significativamente HER4 con una IC50 de 260 nM, inhibe ligeramente MEK1, MEK5, c-Met, Aurora B, Lck, CSK y Lyn B con una IC50 de 1,1 μM, 5,7 μM, 4,2 μM, 1,7 μM, 2,4 μM, 4,7 μM y 5,2 μM, respectivamente, y no muestra actividad contra otras quinasas con una IC50 de >10 μM. Este compuesto muestra una actividad inhibitoria del crecimiento significativa contra las células BT-474 (línea celular de cáncer de mama humano con sobreexpresión de HER2) con una GI50 de 17 nM. [1] En comparación con SYR127063, un potente inhibidor de HER2, muestra una potencia in vitro similar contra HER2 y EGFR. En comparación con los dominios citoplasmáticos completos de las proteínas de tipo salvaje, las mutaciones y los límites acortados utilizados para la determinación de la estructura de HER2-KD y EGFR-KD no cambian significativamente la actividad inhibidora (IC50) de este compuesto químico. Se une a la conformación inactiva de EGFR y muestra un modo de unión similar al de lapatinib en el sitio activo. [2]

Ensayo de quinasa HER2 y EGFR

El dominio citoplasmático (aminoácidos 676-1255) de HER2 humano y el dominio citoplasmático (aminoácidos 669-1210) de EGFR humano se expresan como proteína marcada con un péptido N-terminal (DYKDDDD) utilizando un sistema de expresión de baculovirus. Las quinasas HER2 y EGFR expresadas se purifican mediante gel de afinidad anti-FLAG M2. Los ensayos de quinasa EGFR y HER2 se realizan utilizando [γ-³²P]ATP radiomarcado en placas de 96 pocillos. Las reacciones de quinasa se realizan en 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM MnCl₂, 0,01% Tween 20 y 2 mM DTT que contienen 0,9 μCi de [γ-³²P]ATP por reacción, 50 μM ATP, 5 μg/mL de poli(Glu)-Tyr (4:1) y cada dominio citoplasmático purificado (0,25 μg/mL de EGFR o HER2) en un volumen total de 50 μL. Para medir el valor de IC50 para la inhibición enzimática, se incuban concentraciones crecientes de este compuesto con la enzima durante 5 minutos antes de la reacción a temperatura ambiente. Las reacciones de quinasa se inician añadiendo ATP. Después de 10 minutos a temperatura ambiente, las reacciones se detienen añadiendo un 10% (concentración final) de ácido tricloroacético. Las proteínas fosforiladas con γ-³²P se filtran en una placa de recolección con un cosechador de células y se lavan para eliminar el [γ-³²P]ATP con ácido fosfórico al 3%. Las placas se secan y luego se añaden 25 μL de MicroScint0. La radioactividad se cuenta con un contador de centelleo TopCount. Los valores de IC50 se calculan mediante análisis de regresión no lineal de los porcentajes de inhibición.

La biodisponibilidad oral de TAK-285 es del 97,7% en ratas y del 72,2% en ratones a una dosis de 50 mg/kg. La administración oral de este compuesto a 100 mg/kg dos veces al día durante 14 días muestra una eficacia antitumoral significativa en el modelo de xenoinjerto de tumor BT-474 (con sobreexpresión de HER2) en ratones con una relación tumor/control (T/C) del 29%, sin afectar el peso corporal. Similar al modelo BT-474, este compuesto exhibe una inhibición dosis-dependiente del crecimiento tumoral de xenoinjertos 4-1ST (tumor de cáncer gástrico humano con sobreexpresión de HER2) en ratones, con T/C del 44% y 11% a dosis de 50 mg/kg y 100 mg/kg, dos veces al día, respectivamente, sin una pérdida significativa de peso corporal en ratones. Además, este tratamiento químico induce una inhibición del crecimiento dosis-dependiente de los tumores 4-1ST en ratas con T/C del 38% y 14% a dosis de 6,25 mg/kg y 12,5 mg/kg, y, particularmente notable, una regresión tumoral con T/C del -12% y -16% a dosis de 25 mg/kg y 50 mg/kg, respectivamente. [1] Después de la administración oral de este compuesto, una cantidad significativa de este compuesto está presente en el cerebro de las ratas en forma no unida farmacológicamente activa (aproximadamente el 20% de su nivel plasmático libre), lo que indica que este compuesto tiene un potencial en la terapia de malignidades/metástasis del SNC. [3]