Scriptaid HDAC inhibidor

Scriptaid (6 μM) provoca un aumento >100 veces de la acetilación de histonas en células PANC-1. Este compuesto (8 μM) no es letal para las células PANC-1 y tiene efectos limitados (80% de supervivencia) en MDAMB-468. Aumenta la transcripción de pCMVb, p6SBE-luc y p6MBE-luc independientemente de un inductor positivo de la transcripción. Este químico es capaz de inducir una alta expresión de p6MBE-luc, pCMVb y pUB6/V5-LacZ, impulsada por promotores virales (SV40 y CMV) o humanos (ubiquitina c, UB6), que no dependen de la especificidad del potenciador (SBE versus MBE), el tipo de promotor (viral versus celular), el producto del gen reportero (luciferasa versus b-gal), ni del estado de integración del constructo reportero. [1]Induce altas tasas de desarrollo de ovocitos por transferencia nuclear de células somáticas (SCNT) a la etapa de blastocisto y permitió el desarrollo a término (3,4, 4,2, 7,6, 6,8 y 4,1%) con todas las concentraciones (50, 100, 250, 500 y 2000 nM respectivamente). Este compuesto mejora el desarrollo a término de embriones B6D2F1 clonados de manera dosis-dependiente con el efecto máximo a 250 nM. Permite la clonación de todas las cepas de ratones endogámicos importantes, como C57BL/6, C3H/He, DBA/2 y 129/Sv. Este tratamiento químico aumenta los niveles de ARNm recién sintetizados en embriones clonados. 250 nM de este compuesto tratados hasta por 48 h, no inhiben el desarrollo de embriones fertilizados por ICSI. [2]Inhibe la proliferación de taquizoítos de T. gondii con una IC50 de 39 nM. Este compuesto (0,225 μM) protege completamente las monocapas de HS68 de los taquizoítos de T. gondii. [3]Inhibe el crecimiento de líneas celulares ER negativas, MDA-MB-231, MDA-MB-435 y Hs578t con una IC50 de 0,5-1,0 μg/mL después de 48 h de tratamiento. 1 μg/ml de este compuesto tratado durante 48 h induce una acumulación de proteínas de cola de histona H3 acetilada y H4 acetilada, y un aumento máximo de 20.000 veces del transcrito de ARNm de ER. [4]Inhibe la proliferación y viabilidad de la línea celular de cáncer endometrial Ishikawa y la línea celular de cáncer de ovario SK-OV-3 con una IC50 de 9 μM y 55 μM, respectivamente, mientras que las células epiteliales endometriales humanas normales muestran poca sensibilidad. Las células de cáncer endometrial y las células de cáncer de ovario cultivadas durante 2 días en presencia de este compuesto muestran una acumulación en la fase G0/G1 (5 μM de este químico) y la fase G2/M (10 μM de este compuesto) del ciclo celular, con una disminución concomitante en la proporción de aquellas en la fase S. 10 μM de este químico induce un 56,1% de células Ishikawa apoptóticas con pérdida del potencial de membrana mitocondrial, y niveles disminuidos de ciclina A y bcl-2 en un 50% y 20%, respectivamente. [5]

Ensayo de inmunotransferencia de acetilación de histonas

Las células PANC-1 se tratan con 2 μg/mL de Scriptaid durante 18 h en medio de cultivo. Las células tratadas y no tratadas se recolectan con tripsina-EDTA, se lavan con PBS y se resuspenden en un tampón de muestra de proteínas. La concentración de proteínas se determina mediante reactivos de ensayo de proteínas BCA. Cincuenta μg de proteínas de cada muestra se cargan en un gel de poliacrilamida desnaturalizante al 12%. Las proteínas se transfieren posteriormente a una membrana de nailon utilizando MilliblotGraphite Electroblotter I. La membrana de nailon se incuba con anticuerpo de conejo antihumano acetil-lisina, seguido de anticuerpo de cabra antirratón acoplado a peroxidasa de rábano, desarrollado con sustratos SuperSignal y detectado por película.

Scriptaid provoca una disminución dosis-dependiente en el tamaño de la lesión (una disminución máxima del 45%) a 1,5 a 5,5 mg/kg y una atenuación concomitante en los déficits motores y cognitivos cuando se administra 30 minutos después de la lesión en un modelo de TBI moderado. Se logra una protección comparable incluso cuando el tratamiento se retrasa a 12 h después de la lesión. La protección de las funciones motoras y cognitivas es duradera, ya que se detectan mejoras similares 35 días después de la lesión. Este compuesto induce un aumento en las neuronas sobrevivientes (42%), así como el número/longitud de sus procesos dentro de la región CA3 del hipocampo y el córtex pericontusional. Este tratamiento previene la disminución de fosfo-AKT (p-AKT) y fosfatasa y homólogo de tensina fosforilada delecionada en el cromosoma 10 (p-PTEN) inducida por TBI en neuronas corticales e hipocampales CA3. [6]Este químico (3,5 mg/kg) inhibe claramente el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto de cáncer de mama humano MDA-MB-231, reduciendo el volumen tumoral en un 75 %. [4]