Opaganib (ABC294640) SPHK inhibidor

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Control de calidad

Lote: Pureza: 99.73%

99.73

Dianas relacionadas	PD-1/PD-L1 CXCR STING AhR Immunology & Inflammation related CD markers Interleukins Anti-infection Antioxidant COX
Otros SPHK Inhibidores	PF-543 hydrochloride SKI II K6PC-5 Defensamide (MHP) SKI-V SKI-178

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo

Líneas celulares	Tipo de ensayo	Tiempo de incubación	Descripción de la actividad	PMID
Sf9	Function assay		Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM	25643074
Sf9	Function assay	2 hrs	Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM	30889352
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Información química, almacenamiento y estabilidad

Peso molecular	380.91	Fórmula	C₂₃H₂₅ClN₂O	Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)	3 años-20°Cpolvo
Nº CAS	915385-81-8	Descargar SDF		Almacenamiento de soluciones madre	1 año-80°Cen disolvente 1 mes-20°Cen disolvente
Sinónimos	N/A			Smiles	C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Solubilidad

In vitro
Lote:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Calculadora de Molaridad

Masa	Concentración	Volumen	Peso molecular
=	×	×

Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo Lote:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, contacte con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	24.000mg/ml (63.01mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

Dosis: mg/kg Peso promedio de los animales: g Volumen de dosificación por animal:μL Número de animales:

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH₂O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción

Targets/IC₅₀/Ki	SphK2 (Cell-free assay) 60 μM
In vitro	Opaganib (ABC294640) altera marcadamente la proporción de ceramida/S1P, lo que es consistente con la inhibición de la actividad de SK en células MDA-MB-231. Inhibe la proliferación de células tumorales con valores de IC50 que oscilan entre aproximadamente 6 y 48 μM, y deteriora la migración de células tumorales concomitantemente con la pérdida de microfilamentos. Este compuesto induce la muerte celular no apoptótica, cambios morfológicos en los lisosomas, formación de autofagosomas y aumentos en las vesículas ácidas en células A-498, PC-3 y MDA-MB-231. Tanto en células MCF-7 como en células HEK293 transfectadas con ER, disminuye la actividad de ERE-luciferasa estimulada por E2.
Ensayo de quinasa	Ensayos de Esfingosina Quinasa
Ensayo de quinasa	Los valores de IC50 para Opaganib (ABC294640) y DMS se determinan mediante un ensayo de actividad de SK basado en HPLC recientemente desarrollado. En resumen, los compuestos de prueba se incuban con SK1 o SK2 recombinantes y NBD-Sph en los tampones de ensayo selectivos de isozimas detallados a continuación con 1 mg/ml de albúmina sérica bovina libre de ácidos grasos, 100 μM de ATP y 400 μM de MgCl₂. El producto, es decir, NBD-S1P, se separa de NBD-Sph por HPLC de la siguiente manera: sistema HPLC Waters 2795 con un detector de fluorescencia Waters 2495, columna C8 Chromolith RP-8e (100 × 4.6 mm), fase móvil de 1 ml/min (acetonitrilo/tampón de fosfato de sodio 20 mM, pH 2.5, a 45:55). La fluorescencia se monitoriza con excitación a 465 nm y emisión a 531 nm. La relación de NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) se utiliza como medida de la actividad de SK. Los tampones de ensayo selectivos de isozimas de SK contenían cada uno 20 mM Tris, pH 7.4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-mercaptoetanol, 5% glicerol, 1× inhibidores de proteasa y 1× inhibidores de fosfatasa. Para el tampón de ensayo SK1, se añade 0.25% (final) de Triton X-100; y para el tampón SK2, se añade 1 M (final) de KCl. Los ensayos se realizan durante 2 h a temperatura ambiente, y luego se añade 1.5 volúmenes de metanol para terminar la reacción de la quinasa. Después de 10 min, las muestras se centrifugan a 20,000 g para precipitar la proteína, y los sobrenadantes se analizan por HPLC. En experimentos para determinar el Ki para la inhibición de SK2 por este compuesto, se utiliza el sistema de ensayo ADP Quest para medir la actividad de la quinasa en presencia de concentraciones variables de esfingosina y del compuesto. Para determinar los efectos de Opaganib en la actividad celular de SK, las células MDA-MB-231 casi confluentes se someten a privación de suero durante la noche, y luego se tratan con concentraciones variables del compuesto. Las células se incuban luego con [³H]esfingosina a una concentración final de 1 μM. Las células captan la esfingosina exógena, que se convierte en S1P a través de la actividad de SK, y [³H]S1P se separa de [³H]esfingosina mediante extracción y se cuantifica mediante recuento por centelleo.
In vivo	Opaganib (ABC294640) reduce significativamente el crecimiento tumoral en ratones portadores de xenoinjertos de adenocarcinoma mamario, asociado con la depleción de los niveles de S1P. En ratones inmunodeficientes combinados severos (SCID) portadores de xenoinjertos A-498, retrasa el crecimiento tumoral y eleva los marcadores de autofagia. Este compuesto también protege contra la inflamación inducida por el trasplante hepático y la comunicación cruzada entre las inmunidades innata y adaptativa, eventos importantes que precipitan y exacerban la lesión del injerto, y mejora la función hepática y la supervivencia.
Referencias	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Aplicaciones

Métodos	Biomarcadores	Imágenes	PMID
Western blot	c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3		27517489
Growth inhibition assay	Cell proliferation		25122609

Información del ensayo clínico

(datos de https://clinicaltrials.gov, actualizado el 2024-05-22)

Número NCT	Reclutamiento	Condiciones	Patrocinador/Colaboradores	Fecha de inicio	Fases
NCT02939807	Withdrawn	Carcinoma Hepatocellular	Medical University of South Carolina\|National Cancer Institute (NCI)\|Apogee Biotechnology Corporation	September 30 2019	Phase 2
NCT03377179	Completed	Cholangiocarcinoma\|Cholangiocarcinoma Non-resectable\|Cholangiocarcinoma Perihilar\|Cholangiocarcinoma Extrahepatic\|Cholangiocarcinoma Intrahepatic	RedHill Biopharma Limited	March 7 2018	Phase 2
NCT02757326	Terminated	Multiple Myeloma	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Duke University\|National Cancer Institute (NCI)	December 13 2016	Phase 1\|Phase 2
NCT02229981	Withdrawn	Diffuse Large B Cell Lymphoma\|Kaposi Sarcoma	RedHill Biopharma Limited\|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans\|Apogee Biotechnology Corporation	July 2014	Phase 1\|Phase 2
NCT01488513	Completed	Pancreatic Cancer\|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Medical University of South Carolina\|FDA Office of Orphan Products Development\|National Cancer Institute (NCI)	August 2011	Phase 1

Soporte técnico

Instrucciones de manipulación

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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Estructura química

Peso molecular: 380.91