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solo para uso en investigación

ZSTK474 PI3K inhibidor

Cat. No.S1072

ZSTK474 inhibe las isoformas de clase I de PI3K con una IC50 de 37 nM en un ensayo sin células, principalmente PI3Kδ. Fase 1/2.
ZSTK474 PI3K inhibidor Chemical Structure

Estructura química

Peso molecular: 417.41

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Control de calidad

Lote: Pureza: 99.98%
99.98

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo

Líneas celulares Tipo de ensayo Concentración Tiempo de incubación Formulación Descripción de la actividad PMID
Sf21 insect cells Function assay 1 h Inhibition of bovine recombinant PI3K p110delta expressed in Sf21 insect cells using phosphatidylinositol as substrate after 1 hr by phosphoimaging, IC50=0.7 nM
human HCT116 cells Function assay 15 mins Inhibition of PIK3CA H1047R mutant-mediated cell signaling in human HCT116 cells expressing PTEN assessed as inhibition of insulin-induced pAkt/PKB phosphorylation at Thr308 treated for 15 mins before insulin challenge measured after 5 mins by immunoblotting, IC50=78 nM
human LNCAP cells Proliferation assay 3 days Antiproliferative activity against human LNCAP cells after 3 days by MTS assay, IC50=0.21 μM
human NZB5 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZB5 cells expressing wild type p110alpha assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.22 μM
human NZOV9 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZOV9 cells expressing p110alpha kinase Y1021C mutant assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.29 μM
human MDA-MB-468 cells Cytotoxic assay 48 h Cytotoxicity against PTEN-deficient human MDA-MB-468 cells assessed as inhibition of cell growth after 48 hrs by Cell Titer 96 assay
human A549 cells Function assay 10 μM 1 h Inhibition of PI3K in human A549 cells assessed as reduction in pAkt level at 10 uM after 1 hr by Western blotting analysis
human DMS114 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DMS114 cells
human MKN74 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human MKN74 cells
human SNB78 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB78 cells
human St-4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human St-4 cells
human DU145 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DU145 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human PC3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human PC3 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human OVCAR3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR3 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human KM12 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human KM12 cells
human HT-29 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HT-29 cells
human HCT15 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCT15 cells
human NCI-H226 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H226 cells
human NCI-H522 cells  Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H522 cells 
human A549 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human A549 cells
human HCC2998 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCC2998 cells
human SNB75 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB75 cells
human OVCAR4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR4 cells
human OVCAR5 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR5 cells
human OVCAR8 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR8 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human ACHN cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human ACHN cells
Haga clic para ver más datos experimentales de líneas celulares

Información química, almacenamiento y estabilidad

Peso molecular 417.41 Fórmula

C19H21F2N7O2

 Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)
Nº CAS 475110-96-4 Descargar SDF Almacenamiento de soluciones madre

Sinónimos N/A Smiles C1COCCN1C2=NC(=NC(=N2)N3C4=CC=CC=C4N=C3C(F)F)N5CCOCC5

Solubilidad

In vitro
Lote:

DMSO : 15 mg/mL (35.93 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculadora de Molaridad

Masa Concentración Volumen Peso molecular
Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo
Lote:

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

mg/kg g μL

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH2O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción

Características
First orally administered PI3K inhibitor used in vivo.
Targets/IC50/Ki
PI3Kδ
(Cell-free assay)
4.6 nM
PI3Kα
(Cell-free assay)
16 nM
PI3K
(Cell-free assay)
37 nM
PI3Kβ
(Cell-free assay)
44 nM
PI3Kγ
(Cell-free assay)
49 nM
In vitro

ZSTK474 a 1 μM reduce potentemente la actividad de PI3K al 4,7% del nivel de control, mientras que LY2194002 solo reduce la actividad al 44,6% del control. Este compuesto inhibe las actividades de las p110β, -γ y -δ recombinantes con IC50 de 17 nM, 53 nM y 6 nM, respectivamente. Muestra una potente actividad antiproliferativa contra un panel de 39 líneas celulares de cáncer humano con una GI50 media de 0,32 μM, más eficazmente que la de LY294002 o wortmannin con una GI50 media de 7,4 μM o 10 μM, respectivamente. Este tratamiento químico a 1 μM bloquea el ruffling de la membrana y la generación de PIP3 inducida por el factor de crecimiento derivado de plaquetas en fibroblastos embrionarios murinos (MEF). A 10 μM induce la apoptosis en células OVCAR3, e induce la detención completa de la fase G1 pero no la apoptosis en células A549. Este tratamiento con el compuesto a 0,5 μM disminuye significativamente el nivel de Akt y GSK-3β fosforilados, así como la expresión de la proteína ciclina D1. También inhibe la fosforilación de otros componentes de señalización aguas abajo que están implicados en la regulación de la proliferación celular, incluyendo FKHRL1, FKHR, TSC-2, mTOR y p70S6K de una manera dosis-dependiente. Este químico no inhibe mTOR a 0,1 μM, e incluso a una concentración de 100 μM, inhibe la actividad de mTOR en menos del 40%. Bloquea la migración celular inducida por VEGF y la formación de tubos en células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC), e inhibe la expresión de HIF-1α y la secreción de VEGF en células RXF-631L, exhibiendo una potente actividad antiangiogénica in vitro. Este tratamiento con el compuesto inhibe la producción de IFNγ e IL-17 en células T activadas por concanavalina A, e inhibe la proliferación y la producción de PGE(2) por células sinoviales similares a fibroblastos (FLS).

Ensayo de quinasa
Inhibición de la actividad de PI3K
Las células A549 se lisan en un tampón que contiene 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA y 1% de Igepal CA-630, los lisados se centrifugan a 20.000 g y 4 °C durante 10 minutos, y los sobrenadantes se utilizan como lisado celular (proteína = 2-4 mg/mL). Para inmunoprecipitar PI3K, se incuban 200 μL de lisado celular con anticuerpo policlonal anti-p85 y agarosa de proteína G (5 μL). Las PI3Kα, PI3Kβ y PI3Kδ pueden ser inmunoprecipitadas por el anticuerpo policlonal anti-p85. Las perlas de agarosa que contienen los inmunoprecipitados se lavan dos veces con el tampón A (20 mM Tris-HCl a pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA y 1% de Igepal CA-630), una vez con el tampón B (500 mM LiCl y 100 mM Tris-HCl a pH 7,5), una vez con agua destilada y una vez con el tampón C (100 mM NaCl y 20 mM Tris-HCl a pH 7,5). Los inmunoprecipitados se suspenden en 20 μL del tampón C que contiene fosfatidilinositol a 200 μg/mL. La mezcla se preincuba con concentraciones crecientes de este compuesto a 25 °C durante 5 minutos. Se añaden [γ-32P]ATP (2 μCi por mezcla de ensayo; concentración final, 20 μM) y MgCl2 (concentración final, 20 mM) para iniciar la reacción. La mezcla de reacción se incuba a 25 °C durante 20 minutos. Los productos fosforilados del fosfatidilinositol se separan por cromatografía en capa fina y se visualizan por autorradiografía. La región del fosfatidilinositol-3-fosfato se raspa de la placa, y la radioactividad también se mide con espectroscopia de centelleo líquido. El nivel de inhibición para este químico se determina como el porcentaje de recuentos de 32P por minuto obtenidos sin este compuesto.
In vivo
La administración oral de ZSTK474 inhibe el crecimiento de tumores de melanoma B16F10 de ratón implantados subcutáneamente de manera dosis-dependiente, produciendo una regresión tumoral del 28,5%, 7,1% o 4,9% el día 14 a 100, 200 o 400 mg/kg, respectivamente, lo que es superior a la de los cuatro principales fármacos anticancerosos a sus respectivas dosis máximas tolerables con una regresión tumoral del 96%, 35,7%, 24% o 68,3%, respectivamente. Este tratamiento con el compuesto a 400 mg/kg inhibe completamente el crecimiento de xenoinjertos de A549, PC-3 y WiDr en ratones, e induce la regresión de los tumores de xenoinjertos de A549. Inhibe significativamente el crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto RXF-631L, correlacionado con una reducción significativa del número de microvasos en los ratones tratados. La administración oral de este químico mejora la progresión de la artritis inducida por adyuvante (AIA) en ratas.
Referencias
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19372588/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22039466/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22349137/

Aplicaciones

Métodos Biomarcadores Imágenes PMID
Western blot p-PDK1 / p-GSK3β / p-AKT / AKT P-gp / MRP1 p-Rb / p27 / Cyclin D1 HIF-1α / HIF-1β
S1072-WB1
28388564
Growth inhibition assay Cell viability
S1072-viability1
28388564

Soporte técnico

Instrucciones de manipulación

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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