IC-87114 PI3K inhibidor

IC-87114 inhibe selectivamente PI3Kδ y no es sensible a PI3Kα, β y γ. En neutrófilos humanos, IC87114 (5 µM) inhibe potentemente la biosíntesis de fosfatidilinositol trifosfato (PIP3) y la quimiotaxis estimuladas por N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP). IC87114 (5 µM) también inhibe la morfología polarizada y la diseminación de los neutrófilos. [1] En células blásticas de leucemia mieloide aguda (LMA) humana, como las células mononucleares de médula ósea (BMMC), IC87114 (10 µM) inhibe tanto la fosforilación constitutiva como la estimulada por Flt-3 de Akt y la proliferación celular. [2] También se ha encontrado que IC87114 (5 µM–30 µM) inhibe las respuestas de BMMC estimuladas por SCF o IL-3, que no se observan en células mutantes de PI3Kδ (p110δ^D910A). [3] En células T CD4⁺ CD62L⁺ (vírgenes) y CD62L⁻ (efectoras/memoria) de ratón estimuladas por anti-CD3, IC87114 inhibe la proliferación y la producción de interferón gamma (IFN-γ). Los valores de IC50 de IC87114 son: (1) 1.2 µM y 40 nM, para la proliferación celular CD62L⁺ y CD62L⁻, respectivamente; (2) 120 nM y 1 nM, para la producción de IFN-γ de células CD62L⁺ y CD62L⁻, respectivamente. Se observan efectos similares de IC87114 también en células T humanas. [4] Un estudio reciente revela que en las células cromafines, IC87114 mejora el aumento transitorio de PtdIns(4,5)P2, lo que resulta en una potenciación de la exocitosis. [5]

Ensayo de la quinasa PI3K

Se preparan liposomas de fosfolípidos que contienen fosfatidilinositol-(4,5)-bisfosfato (PIP2). Brevemente, PIP2 bovino y fosfatidilserina (proporción molar 1:2) se secan al vacío y se resuspenden a 1 mM de PIP2 en 20 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 50 mM NaCl y 5 mM EDTA. La suspensión lipídica se somete a una sonicación breve, seguida de 5 ciclos de congelación-descongelación y luego 20 ciclos de extrusión para producir los liposomas. El ensayo se realiza en volúmenes de reacción de 60 µL en un tampón de 20 mM HEPES, pH 7,4, que contiene 1 nM de PI3K, 1 µM de PIP2, 200 µM de ATP, 1 µCi de [γ-³²P]ATP, 5 mM de MgCl₂, más 50 µg/mL de IgG de caballo como proteína portadora. La reacción se incuba durante 10 min a temperatura ambiente, se detiene en 140 de 1 M K₂PO₄, 30 mM EDTA, pH 8,0, se captura en una placa de filtro de difluoruro de polivinilideno de 96 pocillos y se lava cinco veces con 1 M K₂PO₄. Se deja que el filtro se seque completamente y se cuantifica la radioactividad unida. Las diluciones de IC-87114 se ensayan en una concentración final de 1% (p/p) de DMSO.

En ratones, IC-87114 (15 mg/kg–60 mg/kg) inhibe la respuesta alérgica en la piel del dorso y la oreja. [3]En ratones inducidos con anti-CD3 o ConA, IC-87114 (30 mg/kg) reduce las respuestas de hipersensibilidad y disminuye los niveles plasmáticos de citocinas, como IL-2, IL-4, IL-17, IFN-γ y factor de necrosis tumoral-α (TNF-α). [4]