GSK1059615 PI3K inhibidor

A novel, ATP-competitive, and reversible inhibitor of both PI3Kα, β, δ, and γ, and mTOR.

El derivado de piridinilquinolina GSK1059615 es un novedoso inhibidor, ATP-competitivo y reversible de la familia de las PI3K de clase I. Este compuesto inhibe la señalización de PI3K, induce el arresto G1 y la apoptosis, especialmente en células de tumores de mama. [2] Los datos resumidos en otra revisión también muestran que este inhibidor inhibe PI3Kα, β, γ y δ, con K_i de 0,42 nM, 0,6 nM, 0,47 nM y 1,7 nM, respectivamente. [3] Otro informe muestra que este químico inhibe PI3Kα con un IC50 de 2 nM. En células cancerosas T47D y BT474, inhibe la fosforilación de Akt en S473, con un IC50 de 40 nM. [4]

Ensayos de perfilado in vitro HTRF para la inhibición de PI3K

La medición de la inhibición dependiente de GSK1059615 de las PI3K se accede utilizando un kit de ensayo de perfilado de PI3K basado en HTRF. Se utilizan 400 pM de enzima en los ensayos de PI3Kα y δ, 200 pM en los ensayos de PI3Kβ, y 1 nM en el ensayo de PI3Kγ. Además, los ensayos de PI3Kα, β y δ se ejecutan con 150 mM de NaCl y 100 μM de ATP, mientras que el ensayo de PI3Kγ se ejecuta sin NaCl y con 15 μM de ATP. Todas las reacciones se ejecutan a 10 μM de PIP2. Este compuesto se diluye en serie (3 veces en DMSO), y se transfieren 50 nL a una placa de ensayo de bajo volumen de 384 pocillos. El tampón de reacción de PI3K se prepara diluyendo el stock 1:4 con agua desionizada. Se añade DTT recién preparado a una concentración final de 5 mM el día de uso. La adición de enzima y la preincubación de este químico se inician con la adición de 2,5 µL de PI3K en tampón de reacción. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 15 min. Las reacciones se inician con la adición de 2,5 µL de solución de sustrato 2× (PIP2 y ATP en tampón de reacción 1×). Las placas se incuban a temperatura ambiente durante una hora. Las reacciones se detienen con la adición de 2,5 µL de solución de parada. Las reacciones detenidas se procesan para detectar la formación del producto añadiendo 2,5 µL de solución de detección. Después de una incubación de 1 hora en la oscuridad, la señal HTRF se mide en el lector de placas Envision configurado para excitación a 330 nm y detección de doble emisión a 620 nm (Eu) y 665 nm (APC). Se obtiene entonces el valor de IC50.

En modelos de ratones con xenoinjertos de células de cáncer de mama BT474 o HCC1954, GSK1059615 (25 mg/kg) inhibe eficazmente el crecimiento tumoral. [3]