GSK1059615

N.º de catálogoS1360 Lote:S136001

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Datos técnicos

Fórmula

C₁₈H₁₁N₃O₂S

Peso molecular

333.36

Número CAS

958852-01-2

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

2 mg/mL (5.99 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.100mg/ml (0.30mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.100mg/ml (0.30mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

GSK1059615 es un inhibidor dual de PI3Kα/β/δ/γ (reversible) y mTOR con IC50 de 0,4 nM/0,6 nM/2 nM/5 nM y 12 nM, respectivamente. Fase 1.

Objetivos

PI3Kα (Cell-free assay)	PI3Kβ (Cell-free assay)	PI3Kδ (Cell-free assay)	PI3Kγ (Cell-free assay)	mTOR (Cell-free assay)
0.4 nM	0.6 nM	2 nM	5 nM	12 nM

In vitro

El derivado de piridinilquinolina GSK1059615 es un novedoso inhibidor, ATP-competitivo y reversible de la familia de las PI3K de clase I. Este compuesto inhibe la señalización de PI3K, induce el arresto G1 y la apoptosis, especialmente en células de tumores de mama. Los datos resumidos en otra revisión también muestran que este inhibidor inhibe PI3Kα, β, γ y δ, con K_i de 0,42 nM, 0,6 nM, 0,47 nM y 1,7 nM, respectivamente. Otro informe muestra que este químico inhibe PI3Kα con un IC50 de 2 nM. En células cancerosas T47D y BT474, inhibe la fosforilación de Akt en S473, con un IC50 de 40 nM.

In vivo

En modelos de ratones con xenoinjertos de células de cáncer de mama BT474 o HCC1954, GSK1059615 (25 mg/kg) inhibe eficazmente el crecimiento tumoral.

Características

Un novedoso inhibidor, ATP-competitivo y reversible de PI3Kα, β, δ, y γ, y mTOR.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[4]}	Ensayos de perfilado in vitro HTRF para la inhibición de PI3K La medición de la inhibición dependiente de GSK1059615 de las PI3K se accede utilizando un kit de ensayo de perfilado de PI3K basado en HTRF. Se utilizan 400 pM de enzima en los ensayos de PI3Kα y δ, 200 pM en los ensayos de PI3Kβ, y 1 nM en el ensayo de PI3Kγ. Además, los ensayos de PI3Kα, β y δ se ejecutan con 150 mM de NaCl y 100 μM de ATP, mientras que el ensayo de PI3Kγ se ejecuta sin NaCl y con 15 μM de ATP. Todas las reacciones se ejecutan a 10 μM de PIP2. Este compuesto se diluye en serie (3 veces en DMSO), y se transfieren 50 nL a una placa de ensayo de bajo volumen de 384 pocillos. El tampón de reacción de PI3K se prepara diluyendo el stock 1:4 con agua desionizada. Se añade DTT recién preparado a una concentración final de 5 mM el día de uso. La adición de enzima y la preincubación de este químico se inician con la adición de 2,5 µL de PI3K en tampón de reacción. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 15 min. Las reacciones se inician con la adición de 2,5 µL de solución de sustrato 2× (PIP2 y ATP en tampón de reacción 1×). Las placas se incuban a temperatura ambiente durante una hora. Las reacciones se detienen con la adición de 2,5 µL de solución de parada. Las reacciones detenidas se procesan para detectar la formación del producto añadiendo 2,5 µL de solución de detección. Después de una incubación de 1 hora en la oscuridad, la señal HTRF se mide en el lector de placas Envision configurado para excitación a 330 nm y detección de doble emisión a 620 nm (Eu) y 665 nm (APC). Se obtiene entonces el valor de IC50.
Ensayo celular:^{^[4]}	Líneas celulares T47D and BT474 cells Concentraciones 0–1 μM, serially diluted (3-fold) in DMSO Tiempo de incubación 30 min Método Cells are plate at a density of 1 × 10⁴ cells per well in clear flat-bottomed 96-well plates and incubated overnight. Then, GSK1059615 is added and the plates are incubated for 30 min. At the end of incubation, media is aspirated from the plates, and the plate is wash once with cold PBS. 80 μL MSD Lysis buffer is added into each well and the plates are incubated on a shaker at 4 °C for at least 30 min. For Akt duplex assay, plates are washed with 200 μL/well wash buffer for 4 times and tapped on paper towel to blot. Then, 60 μL lysates is added to each well and the plates are incubated on shaker at room temperature for 1 hour. After another 4 times washing, antibody is added (25 μL per well) and the plates are incubated on shaker for 1 hour and washed again. Finally, Read Buffer is added (150 μL per well) and the plates are read immediately. IC50 values are then obtained.

Ensayo de quinasa:^{^[4]}

Ensayos de perfilado in vitro HTRF para la inhibición de PI3K
La medición de la inhibición dependiente de GSK1059615 de las PI3K se accede utilizando un kit de ensayo de perfilado de PI3K basado en HTRF. Se utilizan 400 pM de enzima en los ensayos de PI3Kα y δ, 200 pM en los ensayos de PI3Kβ, y 1 nM en el ensayo de PI3Kγ. Además, los ensayos de PI3Kα, β y δ se ejecutan con 150 mM de NaCl y 100 μM de ATP, mientras que el ensayo de PI3Kγ se ejecuta sin NaCl y con 15 μM de ATP. Todas las reacciones se ejecutan a 10 μM de PIP2. Este compuesto se diluye en serie (3 veces en DMSO), y se transfieren 50 nL a una placa de ensayo de bajo volumen de 384 pocillos. El tampón de reacción de PI3K se prepara diluyendo el stock 1:4 con agua desionizada. Se añade DTT recién preparado a una concentración final de 5 mM el día de uso. La adición de enzima y la preincubación de este químico se inician con la adición de 2,5 µL de PI3K en tampón de reacción. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 15 min. Las reacciones se inician con la adición de 2,5 µL de solución de sustrato 2× (PIP2 y ATP en tampón de reacción 1×). Las placas se incuban a temperatura ambiente durante una hora. Las reacciones se detienen con la adición de 2,5 µL de solución de parada. Las reacciones detenidas se procesan para detectar la formación del producto añadiendo 2,5 µL de solución de detección. Después de una incubación de 1 hora en la oscuridad, la señal HTRF se mide en el lector de placas Envision configurado para excitación a 330 nm y detección de doble emisión a 620 nm (Eu) y 665 nm (APC). Se obtiene entonces el valor de IC50.

Ensayo celular:^{^[4]}

Líneas celulares
T47D and BT474 cells
Concentraciones
0–1 μM, serially diluted (3-fold) in DMSO
Tiempo de incubación
30 min
Método
Cells are plate at a density of 1 × 10⁴ cells per well in clear flat-bottomed 96-well plates and incubated overnight. Then, GSK1059615 is added and the plates are incubated for 30 min. At the end of incubation, media is aspirated from the plates, and the plate is wash once with cold PBS. 80 μL MSD Lysis buffer is added into each well and the plates are incubated on a shaker at 4 °C for at least 30 min. For Akt duplex assay, plates are washed with 200 μL/well wash buffer for 4 times and tapped on paper towel to blot. Then, 60 μL lysates is added to each well and the plates are incubated on shaker at room temperature for 1 hour. After another 4 times washing, antibody is added (25 μL per well) and the plates are incubated on shaker for 1 hour and washed again. Finally, Read Buffer is added (150 μL per well) and the plates are read immediately. IC50 values are then obtained.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19589091/
#
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582534/

http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ml900028r

Expandir

Validación de productos por parte del cliente

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

: , , Antonino Maria Spartà from University of Bologn

: , , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

: , , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

Sellecks GSK1059615 Ha sido citado por 15 Publicaciones

PIK-75 overcomes venetoclax resistance via blocking PI3K-AKT signaling and MCL-1 expression in mantle cell lymphoma [ Am J Cancer Res, 2022, 12(3):1102-1115]	PubMed: 35411248
Phytochemicals inhibit migration of triple negative breast cancer cells by targeting kinase signaling. [ BMC Cancer, 2020, 20(1):4]	PubMed: 31898540
Lethal Poisoning of Cancer Cells by Respiratory Chain Inhibition plus Dimethyl α-Ketoglutarate [ Cell Rep, 2019, 27(3):820-834]	PubMed: 30995479
FRET biosensor-based kinase inhibitor screen for ERK and AKT activity reveals differential kinase dependencies for proliferation in TNBC cells. [ Biochem Pharmacol, 2019, 169:113640]	PubMed: 31536726
[ ACS Pharmacol Transl Sci, 2019, ]	PubMed: 32259061
Inhibition of RPTOR overcomes resistance to EGFR inhibition in triple-negative breast cancer cells [ Int J Oncol, 2018, 52(3):828-840]	PubMed: 29344641
Development of a test that measures real-time HER2 signaling function in live breast cancer cell lines and primary cells. [Huang Y, et al. BMC Cancer, 2017, 17(1):199]	PubMed: 28302091
Single and Combination Drug Screening with Aqueous Biphasic Tumor Spheroids [ SLAS Discov, 2017, 22(5):507-515]	PubMed: 28324660
Gerosuppression by pan-mTOR inhibitors [ Aging (Albany NY), 2016, 8(12):3535-3551]	PubMed: 28077803
Multiparametric Analysis of Oncology Drug Screening with Aqueous Two-Phase Tumor Spheroids. [ Mol Pharm, 2016, 13(11):3724-3735]	PubMed: 27653969

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