DBeQ p97 inhibidor

Rapidly and potently induces activation of executioner caspases and cell death.

DBeQ bloquea la degradación de UbG76V-GFP, ODD-Luc y Luc-ODC con una IC50 de 2,6 μM, 56 μM y 45 μM en células HeLa. Este compuesto es al menos 50 veces menos potente hacia el factor sensible a N-etilmaleimida (NSF) y el proteasoma 26S. Inhibe p97 de forma competitiva con respecto al ATP, con un Ki de 3,2 μM, lo que sugiere que se une al sitio activo del dominio D2. Este compuesto (10 μM) bloquea potentemente la degradación de TCR -GFP en células HEK293. Induce CHOP en 3 horas de manera dependiente de la concentración, pero no aumenta el nivel de p21 en células HEK293. Este compuesto (15 μM) induce una fuerte acumulación de LC3-II en el núcleo, así como en fracciones enriquecidas en membrana y citosólicas en células Hela. Actúa bloqueando la degradación autofágica de LC3-II en lugar de inducir autofagia en células HeLa. Este compuesto (10 μM) promueve rápidamente la activación de las caspasas “ejecutoras” -3 y -7 en células HeLa. Activa la vía apoptótica intrínseca de la caspasa-9 más que la vía extrínseca de la caspasa-8, mientras que STS activa ambas vías en una extensión similar. Este compuesto es cinco veces más activo contra células de mieloma múltiple (RPMI8226) que contra fibroblastos pulmonares fetales humanos normales (MRC5), con células HeLa y Hek293 mostrando sensibilidades intermedias. [1] Exhibe una selectividad de 20 veces para estabilizar sustratos reporteros de UPS dependientes de p97 frente a los independientes en células HeLa. Esta sustancia química altera la degradación de sustratos dentro de las vías ERAD y autofagia. [2] Este (12 μM) inhibe la neutralización intracelular de manera dependiente de la dosis en células HeLa. Este compuesto (10 μM), que inhibe completamente la degradación del virus y el anticuerpo en el experimento del destino de la cápside, no logra prevenir la degradación de IgG Fc. Este (9 μM) reduce el gradiente inicial de neutralización en función de la concentración de anticuerpos. [3] Este compuesto disminuye la fosforilación tanto basal como estimulada por nutrientes de los objetivos de MTOR de manera similar a los efectos de la rapamicina en células U20S. [4]

Ensayo manual de ATPasa

El tampón de ensayo [20 μL de concentración 2,5×, donde 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl₂, 1 mM EDTA y 0,5 mM tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP)] se dispensa en cada pozo de una placa de 96 pozos. La p97 purificada (25 μL de 50 μM) se diluye en 975 μL de tampón de ensayo 1×, y se dispensan 10 μL en cada pozo. Este compuesto (10 μL) o 5 % de DMSO (10 μL) se añade luego a cada pozo, y la placa se incuba a temperatura ambiente durante 10 min. El ensayo de ATPasa se lleva a cabo añadiendo a cada pozo 10 μL de 500 μM ATP (pH 7,5), incubando a temperatura ambiente durante 60 min, y luego añadiendo 50 μL de reactivo Kinase Glo Plus, seguido de una incubación final de 10 min a temperatura ambiente en la oscuridad. La luminiscencia se lee en un Analyst AD. Esta sustancia química se ensaya en un rango de concentraciones (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 y 30 μM) por triplicado.