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In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble. * Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes. * Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)
Preparación de soluciones madre
Actividad biológica
Descripción
DBeQ (JRF 12) es un inhibidor selectivo, potente, reversible y ATP-competitivo de p97 con una IC50 de 1,5 μM.
Objetivos
p97
1.5 μM
In vitro
DBeQ bloquea la degradación de UbG76V-GFP, ODD-Luc y Luc-ODC con una IC50 de 2,6 μM, 56 μM y 45 μM en células HeLa. Este compuesto es al menos 50 veces menos potente hacia el factor sensible a N-etilmaleimida (NSF) y el proteasoma 26S. Inhibe p97 de forma competitiva con respecto al ATP, con un Ki de 3,2 μM, lo que sugiere que se une al sitio activo del dominio D2. Este compuesto (10 μM) bloquea potentemente la degradación de TCR
-GFP en células HEK293. Induce CHOP en 3 horas de manera dependiente de la concentración, pero no aumenta el nivel de p21 en células HEK293. Este compuesto (15 μM) induce una fuerte acumulación de LC3-II en el núcleo, así como en fracciones enriquecidas en membrana y citosólicas en células Hela. Actúa bloqueando la degradación autofágica de LC3-II en lugar de inducir autofagia en células HeLa. Este compuesto (10 μM) promueve rápidamente la activación de las caspasas “ejecutoras” -3 y -7 en células HeLa. Activa la vía apoptótica intrínseca de la caspasa-9 más que la vía extrínseca de la caspasa-8, mientras que STS activa ambas vías en una extensión similar. Este compuesto es cinco veces más activo contra células de mieloma múltiple (RPMI8226) que contra fibroblastos pulmonares fetales humanos normales (MRC5), con células HeLa y Hek293 mostrando sensibilidades intermedias. Exhibe una selectividad de 20 veces para estabilizar sustratos reporteros de UPS dependientes de p97 frente a los independientes en células HeLa. Esta sustancia química altera la degradación de sustratos dentro de las vías ERAD y autofagia. Este (12 μM) inhibe la neutralización intracelular de manera dependiente de la dosis en células HeLa. Este compuesto (10 μM), que inhibe completamente la degradación del virus y el anticuerpo en el experimento del destino de la cápside, no logra prevenir la degradación de IgG Fc. Este (9 μM) reduce el gradiente inicial de neutralización en función de la concentración de anticuerpos. Este compuesto disminuye la fosforilación tanto basal como estimulada por nutrientes de los objetivos de MTOR de manera similar a los efectos de la rapamicina en células U20S.
Características
Induce rápida y potentemente la activación de caspasas efectoras y la muerte celular.
El tampón de ensayo [20 μL de concentración 2,5×, donde 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA y 0,5 mM tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP)] se dispensa en cada pozo de una placa de 96 pozos. La p97 purificada (25 μL de 50 μM) se diluye en 975 μL de tampón de ensayo 1×, y se dispensan 10 μL en cada pozo. Este compuesto (10 μL) o 5 % de DMSO (10 μL) se añade luego a cada pozo, y la placa se incuba a temperatura ambiente durante 10 min. El ensayo de ATPasa se lleva a cabo añadiendo a cada pozo 10 μL de 500 μM ATP (pH 7,5), incubando a temperatura ambiente durante 60 min, y luego añadiendo 50 μL de reactivo Kinase Glo Plus, seguido de una incubación final de 10 min a temperatura ambiente en la oscuridad. La luminiscencia se lee en un Analyst AD. Esta sustancia química se ensaya en un rango de concentraciones (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 y 30 μM) por triplicado.
Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or this compound at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).
Referencias
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21383145/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21606684/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23091005/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23439279/
Sellecks DBeQ Ha sido citado por 11 Publicaciones
Ubiquitin regulatory X (UBX) domain-containing protein 6 is essential for autophagy induction and inflammation control in macrophages
[ Cell Mol Immunol, 2024, 10.1038/s41423-024-01222-1]
White spot syndrome virus benefits from endosomal trafficking, substantially facilitated by a valosin-containing protein, to escape autophagic elimination and propagate in crustacean Cherax quadricarinatus
[ J Virol, 2020, JVI.01570-20]
Functional cooperativity of p97 and histone deacetylase 6 in mediating DNA repair in mantle cell lymphoma cells
[Vekaria PH Leukemia, 2019, 10.1038/s41375-018-0355-y]
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