AZ 960 JAK inhibidor

AZ960 también inhibe muchas quinasas en menos del 50% a una concentración de 0,1 μM, como JAK3 (IC50=9 nM), TrkA, Aurora y ARK5. En células, este compuesto inhibe la fosforilación de STAT5 en células TEL-JAK2 con un IC50 promedio de 15 nM y exhibe una sensibilidad de 15 a 30 veces mayor para la fosforilación de STAT5 impulsada por TEL-JAK2 en comparación con las líneas celulares impulsadas por otros miembros de la familia de quinasas JAK (TEL-JAK1, -JAK3 y -TYK2). Muestra una potente actividad en la inhibición de la proliferación de las líneas celulares TEL-JAK2, -JAK1, -JAK3 y -Tyk2 con valores de GI50 de 25 nM, 230 nM, 279 nM y 214 nM, respectivamente. Además, este químico también inhibe potentemente la proliferación de células SET-2 con un GI50 promedio de 33 nM al reducir los niveles de fosforilación de STAT3 y STAT5. [1] Causa detención del crecimiento y apoptosis del virus linfotrópico de células T humanas tipo 1, HTLV-1pe 1, HTLV-1LV-1osis de proliferación de células T humanas SET-2 con Bcl-xL por ARN de interferencia pequeño potencia los efectos antiproliferativos de AZ 960 en células MT-1. [2] Un estudio reciente muestra que este compuesto conduce a una inhibición significativa del crecimiento clonogénico y la inducción de apoptosis de células AML recién aisladas de pacientes. [3]

Ensayo bioquímico enzimático y perfilado de quinasas

Los estudios de inhibición de AZ 960 se realizan utilizando una quinasa JAK2 recombinante (aminoácidos 808-1132) a una concentración de péptido (péptido Tyk2) de 100 nM y una concentración de ATP de 15 μM. Se utilizan concentraciones de este compuesto que van desde 0,003 μM hasta 30 μM. El modo de inhibición y la constante de inhibición (K_i) de este compuesto contra la quinasa JAK2 se evalúan además mediante cinética de inhibición. Específicamente, se configuran una serie de reacciones catalizadas por JAK2 en tampón HEPES (75 mM, pH 7,3) con una concentración fija de péptido (FL-Ahx-IPTSPITTTYFFFKKK-COOH) y concentraciones variables de ATP y este químico. El progreso de cada reacción se monitorea posteriormente mediante el sistema Caliper LC3000, y la velocidad inicial de cada reacción se extrae del curso temporal de reacción correspondiente. Para definir el modo de inhibición, las velocidades iniciales se grafican contra las concentraciones de ATP correspondientes utilizando gráficos de Lineweaver-Burk y la convergencia característica de las líneas en el eje y demuestra la competitividad de este compuesto con el ATP. La inspección inicial de K_i utilizando la ecuación de Michaelis-Menten reveló que este compuesto es un inhibidor de unión fuerte de JAK2. Este químico se perfila contra 83 quinasas en tres concentraciones de inhibidor (0,01 μM, 0,10 μM y 1,0 μM).