Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilized powder

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Descripción

El péptido liofilizado Poly DYKDDDDK Tag (3X DYKDDDDK Tag Peptide) es un polipéptido compuesto por 23 aminoácidos con un peso molecular de 2864 Da, que puede unirse al anticuerpo Anti-DYKDDDDK Tag por competición, de modo que el anticuerpo unido al anticuerpo Anti-DYKDDDDK Tag puede eluirse durante la inmunoprecipitación de la proteína de fusión DYKDDDDK Tag. El motivo Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp en el polipéptido se repite tres veces, y los 8 aminoácidos del extremo carboxilo constituyen la etiqueta clásica DYKDDDDK Tag (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).

Propiedades

Aplicación

Para uso en la elución competitiva de proteínas de fusión DYKDDDDK del anticuerpo monoclonal ANTI-DYKDDDDK Tag en solución o unido a agarosa en las perlas Anti-DYKDDDDK.

Atención

1. Lea atentamente el Manual de Usuario antes del primer uso;

2. Evite la congelación, el secado y la centrifugación a alta velocidad durante el uso y almacenamiento de las perlas;

3. Este producto es solo para uso en I+D, no para fines farmacológicos, domésticos u otros. Consulte la Hoja de Datos de Seguridad del Material para obtener información sobre los peligros y las prácticas de manipulación segura.

Procedimiento

Elución de péptido de la proteína de fusión DYKDDDDK de las perlas Anti-DYKDDDDK

1. Suspenda completamente el gel de afinidad Anti-DYKDDDDK Tag en el vial, para obtener una suspensión uniforme de la resina. Transfiera rápidamente 10 μl de la suspensión de gel (aproximadamente 5 μl de volumen de gel compactado) a un tubo nuevo.

2. Añada 0,6 mL de TBS. Suspenda completamente el gel de afinidad Anti-DYKDDDDK Tag pipeteando. Centrifugue la resina a 5000 rpm durante 30 segundos y retire con cuidado el sobrenadante. Asegúrese de eliminar todo el tampón de lavado sin desechar la resina. Repita 3-4 veces.

3. Agregue 500 μL de extractos periplásmicos celulares a la resina lavada.

4. Agite suavemente las muestras durante 2 horas a 4°C.

5. Centrifugue la resina durante 30 segundos a 5000 rpm. Transfiera los sobrenadantes a un tubo nuevo.

6. Lave la resina con 0,5 mL de TBS hasta que la DO280 del sobrenadante sea <0,05.

7. Elución de la proteína de fusión DYKDDDDK por competición con el péptido Poly DYKDDDDK. Eluya la proteína de fusión DYKDDDDK unida mediante elución competitiva con cinco alícuotas de un volumen de columna de una solución que contenga 200-400 ug/mL de péptido Poly DYKDDDDK en TBS.

8. Reciclaje de las perlas Anti-DYKDDDDK
El péptido Poly DYKDDDDK puede no eluir toda la proteína de fusión DYKDDDDK unida a las perlas Anti-DYKDDDDK. Se recomienda regenerar las perlas Anti-DYKDDDDK inmediatamente después de su uso lavándolas con tres alícuotas de 5 mL de glicina HCl 0,1 M, pH 3,5. El gel debe reequilibrarse inmediatamente en TBS hasta que el efluente tenga un pH neutro.

Nota: No deje las perlas Anti-DYKDDDDK en glicina HCl durante más de 20 minutos.
9. Almacenamiento de las perlas Anti-DYKDDDDK Lave las perlas Anti-DYKDDDDK tres veces con 5 mL de glicerol al 50% con 10 mM de fosfato de sodio, 150 mM de cloruro de sodio, pH 7,4, que contenga 0,02% (p/v) de azida de sodio. Luego agregue otros 5 mL de glicerol al 50% con 10 mM de fosfato de sodio, 150 mM de cloruro de sodio, pH 7,4, que contenga 0,02% (p/v) de azida de sodio y almacene a -20°C sin drenar.

Almacenamiento (desde la fecha de recepción)

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