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Anti-DYKDDDDK Tag Affinity Gel
El Gel de Afinidad Anti-DYKDDDDK Tag es un anticuerpo monoclonal murino IgG2b purificado con Proteína A, unido covalentemente a sepharose 4B.
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Comparación de Productos
Descripción
El Gel de Afinidad Anti-DYKDDDDK Tag es un anticuerpo monoclonal murino IgG2b purificado con Proteína A, unido covalentemente a sepharose 4B.
Propiedades
| Clon de anticuerpo | 1E6 |
|---|---|
| Isotipo de anticuerpo | IgG2b de ratón |
| Purificación de anticuerpos | Purificado con Proteína A |
| Anticuerpo unido | NLT 7,5 gramos de anticuerpo/Litro de gel |
| Aplicación | Purificación de Proteínas, Inmunoprecipitación |
| Composición del producto | Este producto es una suspensión de gel al 50% preparada en una solución madre de 10 mM Na3PO4, 150 mM NaCl, 50% glicerol, pH 7,4, que contiene 0,02% (p/v) de azida de sodio |
| Volumen recomendado | IP: 5 μl de gel para 500 μl de solución de proteína cruda |
| Capacidad de unión | Mínimo 1,1 mg de una proteína de fusión DYKDDDDK Tag eluida por ml de resina empaquetada |
| Características de unión | Proteína de fusión DYKDDDDK Tag N-terminal Met: Met-DYKDDDDK Tag–Proteína Proteína de fusión DYKDDDDK Tag N-terminal: DYKDDDDK Tag–Proteína Proteína de fusión DYKDDDDK Tag C-terminal: Proteína-DYKDDDDK Tag |
Almacenamiento (desde la fecha de recepción)
El producto sin abrir es estable a -20°C durante 2 años. Después de su uso, la resina debe limpiarse y almacenarse en glicerol al 50% con 10 mM de fosfato de sodio, 150 mM de cloruro de sodio, pH 7,4, que contiene 0,02% de azida de sodio para proteger el producto. No congelar en ausencia de glicerol.
Protocolo
Este protocolo de muestra se recomienda para la inmunoprecipitación de proteínas con etiqueta DYKDDDDK (DYKDDDDK-tagged Proteins).
| Preparación del gel de afinidad |
1. Suspender completamente el Gel de Afinidad Anti-DYKDDDDK Tag en el vial, para obtener una suspensión uniforme de la resina. Transferir rápidamente 10 μl de la suspensión de gel (aproximadamente 5 μl de volumen de gel empaquetado) a un tubo nuevo. 2. Añadir 0,5 mL de TBS. Suspender completamente el Gel de Afinidad Anti-DYKDDDDK Tag mediante pipeteo. Centrifugar la resina a 5000 rpm durante 30 segundos y retirar cuidadosamente el sobrenadante. Asegurarse de retirar todo el tampón de lavado sin desechar la resina. Repetir 3-4 veces. 3. Añadir 500 μl de extractos periplásmicos celulares a la resina lavada. 4. Agitar suavemente las muestras durante 2 horas a 4°C. 5. Centrifugar la resina durante 30 segundos a 5000 rpm. Transferir los sobrenadantes a un tubo nuevo. 6. Lavar la resina con 0,5 ml de TBS hasta que la DO280 del sobrenadante sea < 0,05. 7. Se puede aplicar una condición de pH extremo o un exceso de péptido poli DYKDDDDK Tag a la resina para eluir la proteína con etiqueta DYKDDDDK. Elegir los métodos de elución de acuerdo con las características de la proteína diana y la aplicación posterior. 8. Para la detección directa de la proteína diana, añadir tampón de carga de muestra SDS-PAGE 2x en una proporción 1:1 a 20 μl de suspensión de gel. Hervir la muestra durante 5 minutos. Centrifugar a 5000 rpm durante 30 segundos. Transferir cuidadosamente el sobrenadante a un vial nuevo para SDS-PAGE. |
| Unión de la muestra | |
| Lavado de la resina | |
| Elución y detección |
Selleck proporciona Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilized powder para la elución del producto proteico.
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