AM1241 Cannabinoid Receptor agonist

AM-1241 is een protean agonist van CB2 op basis van het verschillende effect dat is waargenomen in verschillende assays (calciuminstroom, extracellulair signaal-gereguleerde kinase (ERK) fosforylatie en cAMP-meting)) en op de overgang van neutraal antagonisme naar agonisme in de cAMP-assay wanneer de forskolineconcentratie wordt verlaagd. In [³H]CP 55,940 competitiebindingsassays vertoont deze verbinding een hoge affiniteit voor de menselijke CB2-receptor met een K_i-waarde van ongeveer 7 nM, terwijl de affiniteit voor de menselijke CB1-receptor meer dan 80 keer zwakker is, met behulp van membraanpreparaten van stabiele HEK- en CHO-cellijnen die respectievelijk de recombinante menselijke CB2- en CB1-receptoren tot expressie brengen. [2]

Bindingsassays

Binding aan cannabinoïdereceptoren wordt getest met behulp van competitie-evenwichtsbinding versus [³H]CP55,940. AM-1241 wordt verdund in 25 mM Tris-base (pH 7,4)/5 mM MgCl₂/1 mM EDTA/0,1% essentieel vetzuurvrij BSA en overgebracht naar Regisil-behandelde 96-well platen. [³H]CP55,940 (DuPont_NEN; specifieke activiteit 100–180 Ci/mmol; 1 Ci =37 GBq) wordt toegevoegd tot een concentratie van 0,8 nM. Membranen bereid uit rattenhersenen (met CB1-receptoren) of muizenmilt (met CB2-receptoren) worden toegevoegd (≈50 μg membraaneiwit per well), platen worden 1 uur bij 30 °C geïncubeerd en de inhoud wordt gefilterd over Packard Unifilter GF/B 96-well filters met behulp van een Packard Filtermate 196 celfilter. Filters worden gewassen met ijskoude 50 mM Tris-base/5 mM MgCl₂/0,5% BSA en gedroogd. Gebonden radioactiviteit wordt gekwantificeerd en gecorrigeerd voor niet-specifieke binding, en de resultaten worden genormaliseerd tussen 0% en 100% [³H]CP-55,940 specifiek gebonden. IC50 wordt bepaald door niet-lineaire regressieanalyse met GraphPad PRISM en omgezet naar een Ki-waarde. Alle gegevens worden in duplo verzameld. IC50- en Ki-waarden worden bepaald uit drie onafhankelijke experimenten.

AM-1241 keert dosisafhankelijk de tactiele en thermische overgevoeligheid om die wordt veroorzaakt door ligatie van de L5- en L6-ruggenmergzenuwen bij ratten. Deze verbinding is ook actief in het blokkeren van door ruggenmergzenuwligatie geïnduceerde tactiele en thermische overgevoeligheid bij muizen zonder CB1-receptoren (CB1-/- muizen), wat bevestigt dat het sensorische overgevoeligheid omkeert, onafhankelijk van acties op CB1-receptoren.[1] Deze chemische stof (100, 330 μg/kg i.p.) onderdrukt de ontwikkeling van carrageen-opgewekte thermische en mechanische hyperalgesie en allodynie. En deze onderdrukking wordt geblokkeerd door CB2-antagonist SR144528 maar niet door CB1-antagonist SR141716A. [3] Het produceert dosisafhankelijke antinociceptie op een thermische stimulus die op de achterpoot wordt aangebracht, wanneer het in de achterpoot aan de testzijde (ipsilaterale i.poot) wordt toegediend, terwijl het veel minder actief is aan de contralaterale zijde. A50 (analgetische dosis die een 50% effect oplevert) van deze verbinding is 847 μg/kg, met het maximaal mogelijke effect (100% MPE) bereikt bij 3,3 mg/kg. Het produceert ook dosisafhankelijke antinociceptie wanneer het intraperitoneaal (i.p.) wordt toegediend, met een A50 van 103 μg/kg. De antinociceptieve werkingen van deze chemische stof worden geblokkeerd door de CB2-receptorselectieve antagonist AM630, maar niet door de CB1-receptorselectieve antagonist AM251. Deze verbinding produceert niet de CZS-cannabinoïde-effecten van hypothermie, catalepsie, remming van activiteit of verminderde ambulatie, terwijl deze tetrade van effecten wordt geproduceerd door de gemengde CB1/CB2-receptoragonist WIN55,212-2.[4] Dagelijkse injecties van deze chemische stof via een i.p.-route, gestart bij het begin van de symptomen, verhogen het overlevingsinterval na het begin van amyotrofische laterale sclerose (ALS) met 56% in een transgene muismodel van ALS. [5]