Zotarolimus (ABT-578)

Zotarolimus (ABT-578) es un análogo semisintético de rapamicina, elaborado sustituyendo un anillo de tetrazol por el grupo hidroxilo nativo en la posición 42 de la rapamicina. Este compuesto es altamente eficaz para inhibir la proliferación de células de músculo liso y células endoteliales, con valores de IC50 de 2,9 nM y 2,6 nM, respectivamente. [1] Es mecánicamente similar al sirolimus en cuanto a su alta afinidad de unión a la inmunofilina FKBP12 y una potencia comparable para inhibir la proliferación in vitro de linfocitos T humanos y de rata. Zotarolimus inhibe la proliferación de linfocitos T humanos y de rata inducida por Con A con IC50 de 7,0 nM y 1337 nM respectivamente. [2]

Zotarolimus (ABT-578) reduce eficazmente la formación de neointima en un modelo porcino bien caracterizado de restenosis de la arteria coronaria de 28 días. Parece eficaz en la prevención del engrosamiento neointimal, reduciendo la pérdida tardía de 1,03 a 0,62 mm con una reducción del 47% en TVF en comparación con los stents de metal desnudo (15,4% con el stent Driver a 8,1% con el stent Endeavor). [1] Este compuesto es eficaz para suprimir el DTH adyuvante, el EAE y el rechazo de aloinjertos cardíacos con valores de ED50 de 1,72, 1,17 y 3,71 mg/kg/día, respectivamente. [2]

• Afición de unión a FKBP12

  Las placas de microtitulación de 96 pocillos se recubren primero con la proteína de fusión FKBP-12 CMP-KDO sintasa a 10 μg/mL, 100 μL/pocillo durante 2-3 h, seguido de la adición de 50 μL/pocillo de tampón A (2% BSA y 0,2% Tween-20 en D-PBS) durante 30-60 min. Las placas de microtitulación se lavan luego tres veces con tampón B (0,2% Tween en D-PBS, pH ajustado a 7,4). Se añaden cincuenta microlitros de tampón A (para el máximo), 20 μM de FK506 en tampón A (para el fondo), o varias concentraciones de zotarolimus (ABT-578) (10 pM-1 μM) en tampón A a cada pocillo, seguido de la adición de 50 μL de A-79397 (un análogo de FK506)-conjugado de fosfatasa alcalina en tampón A. Las placas de microtitulación se incuban a temperatura ambiente durante 2-2,5 h, seguidas de tres lavados con tampón B. Se añaden aproximadamente 100 μL de pNPP (p-nitrofenil-fosfato) en 0,1 M de aminometilpropanol a cada pocillo y las placas se incuban a temperatura ambiente durante 90-120 min. La absorbancia a 405 nM se lee utilizando una placa ELISA

• Líneas celulares

  Human coronary artery cells

• Concentraciones

  ~1 μM

• Tiempo de incubación

  5 days

• Método

  Cell proliferation is assayed by measuring tritiated thymidine incorporation in vitro. Human coronary artery cells (hCa) are seeded into tissue culture flasks for expansion and applied to 96-well plates at desired density in complete media (5000 hCaSMC; 10 000 hCaEC). After 2 days, complete media is replaced with incomplete media to synchronize cells and induce G0 state. Two days later, incomplete media are removed and replaced with complete media (serum/growth factors) to induce G0 to G1 transition. Complete media also contain Zotarolimus (ABT-578) at desired concentrations to determine its effects on cell proliferation. On day 7, ³H-thymidine is added to cells to monitor DNA synthesis, and cells are harvested after overnight incorporation of radioactivity. After an incubation period of 72 h, 25 μL (1 μCi/well) of ³H-thymidine are added to each well. The cells are incubated at 37°C for 16-18 h to allow for incorporation of ³H-thymidine into newly synthesized DNA and the cells harvested onto 96-well plates containing bonded glass fibre filters . The filter plates are air-dried overnight, MicroScint-20 (25 μL) added to each filter well and counted. Drug activity is determined by the inhibition of ³H-thymidine incorporation into newly synthesized DNA relative to cells grown in complete media.

• Modelos animales

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosificaciones

  2.5 mg/kg

• Administración

  intravenous or oral