WAY-600

N.º de catálogoS2689 Lote:S268901

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₈H₃₀N₈O

Peso molecular

494.59

Número CAS

1062159-35-6

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

WAY-600 es un potente inhibidor, ATP-competitivo y selectivo de mTOR con una IC50 de 9 nM; este compuesto bloquea mTORC1/P-S6K(T389) y mTORC2/P-AKT(S473) pero no P-AKT(T308); es selectivo para mTOR que para PI3Kα (>100 veces) y PI3Kγ (>500 veces).

Objetivos

mTOR

9 nM

In vitro

Immune-complex kinase assay shows mTORC2-specific substrate His6-AKT or the mTORC1 substrate His6-S6K is dose dependently inhibited by WAY-600. This compound globally inhibits mTOR signaling and AKT function in cellular models dose dependently. It profoundly inhibits cap-dependent and global protein synthesis in MDA361, human breast cancer cells. This chemical shows antiproliferative effects in various cancer cell lines involving G1 cell cycle arrest and selective apoptosis. It down-regulate angiogenic factors, VEGF and HIF-1α, in U87MG, MDA361 and LNCap cells.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Formato DELFIA de FLAG-TOR purificado Los ensayos de rutina con FLAG-TOR purificado (FL y 3.5) se realizan en placas de 96 pocillos de la siguiente manera. Las enzimas se diluyen primero en tampón de ensayo de quinasa (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcistina LR y 100 lg/mL BSA). En cada pocillo, se mezclan brevemente 12 μL de la enzima diluida con 0.5 μL de inhibidor de prueba o vehículo de control dimetilsulfóxido (DMSO). La reacción de quinasa se inicia añadiendo 12.5 μL de tampón de ensayo de quinasa que contiene ATP y His6-S6K para dar un volumen de reacción final de 25 μL que contiene 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM de ATP y 1.25 μM de His6-S6K. La placa de reacción se incuba durante 2 horas (lineal de 1 a 6 horas) a temperatura ambiente con agitación suave y luego se detiene añadiendo 25 μL de tampón de parada (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA y 20 mM EGTA). La detección DELFIA del His6-S6K fosforilado (Thr-389) se realiza a temperatura ambiente utilizando un anticuerpo monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marcado con Europio-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu por anticuerpo). Cuarenta y cinco microlitros de la mezcla de reacción de quinasa terminada se transfieren a una placa MaxiSorp que contiene 55 μL de PBS. Se permite que el His6-S6K se adhiera durante 2 horas, después de lo cual los pocillos se aspiran y se lavan una vez con PBS. Se añaden cien microlitros de tampón DELFIA con 40 ng/mL de anticuerpo Eu-P(T389)-S6K. La unión del anticuerpo continúa durante 1 hora con agitación suave. Los pocillos se aspiran y se lavan cuatro veces con PBS que contiene 0.05% de Tween 20 (PBST). Se añaden cien microlitros de solución de mejora DELFIA a cada pocillo y las placas se leen en un lector de placas modelo PerkinElmer Victor. Los datos obtenidos se utilizan para calcular la actividad enzimática y la inhibición enzimática por posibles inhibidores.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentraciones 0-100 μM Tiempo de incubación 24 or 48 hours Método For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Formato DELFIA de FLAG-TOR purificado
Los ensayos de rutina con FLAG-TOR purificado (FL y 3.5) se realizan en placas de 96 pocillos de la siguiente manera. Las enzimas se diluyen primero en tampón de ensayo de quinasa (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcistina LR y 100 lg/mL BSA). En cada pocillo, se mezclan brevemente 12 μL de la enzima diluida con 0.5 μL de inhibidor de prueba o vehículo de control dimetilsulfóxido (DMSO). La reacción de quinasa se inicia añadiendo 12.5 μL de tampón de ensayo de quinasa que contiene ATP y His6-S6K para dar un volumen de reacción final de 25 μL que contiene 800 ng/mL de FLAG-TOR, 100 μM de ATP y 1.25 μM de His6-S6K. La placa de reacción se incuba durante 2 horas (lineal de 1 a 6 horas) a temperatura ambiente con agitación suave y luego se detiene añadiendo 25 μL de tampón de parada (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA y 20 mM EGTA). La detección DELFIA del His6-S6K fosforilado (Thr-389) se realiza a temperatura ambiente utilizando un anticuerpo monoclonal anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marcado con Europio-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu por anticuerpo). Cuarenta y cinco microlitros de la mezcla de reacción de quinasa terminada se transfieren a una placa MaxiSorp que contiene 55 μL de PBS. Se permite que el His6-S6K se adhiera durante 2 horas, después de lo cual los pocillos se aspiran y se lavan una vez con PBS. Se añaden cien microlitros de tampón DELFIA con 40 ng/mL de anticuerpo Eu-P(T389)-S6K. La unión del anticuerpo continúa durante 1 hora con agitación suave. Los pocillos se aspiran y se lavan cuatro veces con PBS que contiene 0.05% de Tween 20 (PBST). Se añaden cien microlitros de solución de mejora DELFIA a cada pocillo y las placas se leen en un lector de placas modelo PerkinElmer Victor. Los datos obtenidos se utilizan para calcular la actividad enzimática y la inhibición enzimática por posibles inhibidores.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentraciones
0-100 μM
Tiempo de incubación
24 or 48 hours
Método
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Referencias

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Selleck's WAY-600 Ha sido citado por 3 Publicaciones

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

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