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In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble. * Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes. * Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)
Preparación de soluciones madre
Actividad biológica
Descripción
UNC0638 es una sonda qu mica potente, selectiva y con capacidad de penetraci n celular para la histona metiltransferasa G9a y GLP con IC50 de <15 nM y 19 nM, respectivamente, mostrando selectividad sobre una amplia gama de dianas epigen ticas y no epigen ticas. Este compuesto tiene actividades antivirales.
Objetivos
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
UNC0638 es una sonda qu mica potente, selectiva y con penetraci n celular para G9a y GLP, con una relaci n toxicidad/funci n de >100, en comparaci n con <6 para BIX01294. Este compuesto es un inhibidor selectivo de G9a y GLP sobre una amplia gama de dianas epigen ticas y no epigen ticas. Es m s de 10.000 veces selectivo contra SET7/9 (una HMTasa H3K4), SET8 (una HMTasa H4K20), PRMT3 y SUV39H2. En c lulas MDA-MB-231, este qu mico (exposici n de 48 h) reduce los niveles de H3K9me2 de manera dependiente de la concentraci n con una IC50 de 81 nM. Su tratamiento de una variedad de l neas celulares da como resultado niveles globales m s bajos de H3K9me2, equivalentes a los niveles observados para la supresi n por ARN de horquilla peque a de G9a y GLP, con la potencia funcional de este compuesto bien separada de su toxicidad. Reduce notablemente la clonogenicidad de las c lulas MCF7, reduce la abundancia de marcas H3K9me2 en los promotores de genes end genos conocidos regulados por G9a y afect desproporcionadamente varios loci gen micos que codifican microARNs. En c lulas madre embrionarias de rat n, esta sonda reactiva los genes silenciados por G9a y un gen reportero retroviral de manera dependiente de la concentraci n sin promover la diferenciaci n.
In vivo
En estudios de metabolismo de f rmacos y farmacocin tica en ratones, UNC0638 tuvo un alto aclaramiento, una vida media corta, un alto volumen de distribuci n y una baja exposici n despu s de la administraci n intravenosa, oral o intraperitoneal. Por lo tanto, aunque este compuesto probablemente no sea adecuado para estudios en animales in vivo debido a los bajos niveles de exposici n, su alta estabilidad en condiciones de ensayo celular, en combinaci n con su alta potencia y selectividad, lo convierte en una herramienta qu mica ideal para estudios basados en c lulas.
Este ensayo utiliza SAHH para hidrolizar el producto de metiltransferencia S-adenosilhomociste na a homociste na y adenosina en presencia de adenosina desaminasa que convierte la adenosina en inosina. La concentraci n de homociste na se determina luego mediante la conjugaci n de su grupo sulfhidrilo libre a un fluor foro sensible al tiol, ThioGlo. Para las determinaciones de IC50, las mezclas de ensayo se preparan en tamp n de fosfato de potasio 25 mM pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0.01% Trit n X 100 con 5 M SAHH, 0.3 U/mL de adenosina desaminasa, 25 M SAM y 15 M ThioGlo. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 y SUV39H2 se ensayan a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 M y 100 nM, respectivamente. UNC0638 se a ade en concentraciones que van desde 4 nM hasta 16 M. Despu s de 2 min de incubaci n, las reacciones se inician mediante la adici n de los p tidos de histonas: 10 M H3(1-25) para G9a, 20 M H3(1-25) para EHMT1, 100 M H3(1-25) para SETD7, 500 M H4(1-24) para SETD8, 10 M H4(1-24) para PRMT3 y 200 M H3K9Me1 (1-15) para SUV39H2. La reacci n de metilaci n se sigue monitorizando el aumento de la fluorescencia usando un lector de placas Biotek Synergy2 con filtro de excitaci n de 360/40 nm y filtro de emisi n de 528/20 nm durante 20 min en formato de placa de 384 pocillos. Los valores de actividad se corrigen restando el fondo causado por el p tido o la prote na. Los valores de IC50 se calculan usando Sigmaplot. Las desviaciones est ndar se calculan a partir de dos experimentos independientes.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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