UNC0631

N.º de catálogoS7610 Lote:S761001

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Datos técnicos

Fórmula

C₃₇H₆₁N₇O₂

Peso molecular

635.93

Número CAS

1320288-19-4

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (157.25 mM)

Ethanol

5 mg/mL (7.86 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

UNC 0631 es un potente inhibidor de la Histone Methyltransferase G9a con una CI50 de 4 nM. Reduce potentemente los niveles de H3K9me2 en células MDA-MB-231 con una CI50 de 25 nM.

Objetivos

G9a

In vitro

En células MCF7, 22RV1 e IMR90, UNC0631 reduce potentemente los niveles de H3K9me2 y muestra una excelente separación de la potencia funcional frente a la toxicidad celular. Por lo tanto, este compuesto puede utilizarse como una herramienta para la comunidad de investigación biomédica para investigar más a fondo la biología de G9a y su papel en la remodelación de la cromatina.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos acoplados a SAHH Este ensayo utiliza SAHH para hidrolizar el producto de metiltransferencia SAH a homocisteína y adenosina en presencia de adenosina desaminasa que convierte la adenosina en inosina. La concentración de homocisteína se determina luego mediante la conjugación de su porción sulfhidrilo libre a un fluoróforo sensible a tioles, ThioGlo. Para las determinaciones de CI50, las mezclas de ensayo se preparan en tampón de fosfato de potasio 25 mM pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0.01% Triton X-100 con 5 μM SAHH, 0.3 U/mL de adenosina desaminasa, 25 μM SAM y 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 y SUV39H2 se ensayan a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM y 100 nM, respectivamente. Este compuesto se añade en concentraciones que van desde 4 nM hasta 16 μM. Después de 2 min de incubación, las reacciones se inician mediante la adición de los péptidos de histonas: 10 μM H3(1–25) para G9a, 20 μM H3(1–25) para GLP, 100 μM H3(1–25) para SETD7, 500 μM H4(1–24) para SETD8, 10 μM H4(1–24) para PRMT3 y 200 μM H3K9Me1 (1–15) para SUV39H2. La reacción de metilación se sigue monitorizando el aumento de la fluorescencia utilizando un lector de placas Biotek Synergy2 con filtro de excitación de 360/40 nm y filtro de emisión de 528/20 nm durante 20 min en formato de placa de 384 pocillos. Los valores de actividad se corrigen restando el fondo causado por el péptido o la proteína. Los valores de CI50 se calculan utilizando Sigmaplot. Las desviaciones estándar se calculan a partir de dos experimentos independientes.
Ensayo celular:^[1]	Líneas celulares MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells Concentraciones ~10 μM Tiempo de incubación 48 hours Método MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos acoplados a SAHH
Este ensayo utiliza SAHH para hidrolizar el producto de metiltransferencia SAH a homocisteína y adenosina en presencia de adenosina desaminasa que convierte la adenosina en inosina. La concentración de homocisteína se determina luego mediante la conjugación de su porción sulfhidrilo libre a un fluoróforo sensible a tioles, ThioGlo. Para las determinaciones de CI50, las mezclas de ensayo se preparan en tampón de fosfato de potasio 25 mM pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0.01% Triton X-100 con 5 μM SAHH, 0.3 U/mL de adenosina desaminasa, 25 μM SAM y 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 y SUV39H2 se ensayan a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM y 100 nM, respectivamente. Este compuesto se añade en concentraciones que van desde 4 nM hasta 16 μM. Después de 2 min de incubación, las reacciones se inician mediante la adición de los péptidos de histonas: 10 μM H3(1–25) para G9a, 20 μM H3(1–25) para GLP, 100 μM H3(1–25) para SETD7, 500 μM H4(1–24) para SETD8, 10 μM H4(1–24) para PRMT3 y 200 μM H3K9Me1 (1–15) para SUV39H2. La reacción de metilación se sigue monitorizando el aumento de la fluorescencia utilizando un lector de placas Biotek Synergy2 con filtro de excitación de 360/40 nm y filtro de emisión de 528/20 nm durante 20 min en formato de placa de 384 pocillos. Los valores de actividad se corrigen restando el fondo causado por el péptido o la proteína. Los valores de CI50 se calculan utilizando Sigmaplot. Las desviaciones estándar se calculan a partir de dos experimentos independientes.

Ensayo celular:^[1]

Líneas celulares
MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells
Concentraciones
~10 μM
Tiempo de incubación
48 hours
Método
MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21780790/

Sellecks UNC0631 Ha sido citado por 1 Publicación

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]

PubMed: 30135193

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