Trametinib (GSK1120212)

Trametinib (GSK1120212) inhibe la fosforilación de MBP independientemente del isotipo de Raf y MEK, con IC50 que van desde 0,92 nM hasta 3,4 nM. No demuestra inhibición de las actividades quinasas de c-Raf, B-Raf, ERK1 y ERK2. Además, este compuesto no muestra una actividad inhibidora drástica contra las otras 98 quinasas. Muestra una potente actividad inhibidora contra líneas celulares de cáncer colorrectal humano. Las células HT-29 y COLO205, que se sabe que tienen un mutante B-Raf constitutivamente activo, son las más sensibles a él con IC50 de 0,48 nM y 0,52 nM, respectivamente. Las líneas celulares que portan una mutación K-Ras muestran un amplio rango de sensibilidad a él con IC50 de 2,2-174 nM. Por el contrario, las células COLO320 DM, que portan el gen de tipo salvaje tanto en B-Raf como en K-Ras, son resistentes incluso a 10 μM. El tratamiento durante 24 horas induce la detención del ciclo celular en la fase G1 en todas las líneas celulares sensibles. Consistentemente, esto lleva a la regulación al alza de p15^INK4b y/o p27^KIP1 en la mayoría de las líneas celulares de cáncer colorrectal. Inhibe la fosforilación constitutiva de ERK en todas las líneas celulares sensibles. Este compuesto induce la Apoptosis tanto en células HT-29 como en COLO205, pero las células COLO205 son más sensibles que las células HT-29 en términos de inducción de Apoptosis. [1] Bloquea la producción de factor de necrosis tumoral-α e interleucina-6 de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC). [2]

La administración oral de Trametinib (GSK1120212) a 0,3 mg/kg o 1 mg/kg una vez al día durante 14 días es eficaz para inhibir el crecimiento del xenoinjerto HT-29, y 1 mg/kg de este compuesto bloquea casi por completo el aumento del tumor. La fosforilación de ERK1/2 se inhibe completamente en los tejidos tumorales establecidos mediante una dosis oral única de 1 mg/kg, y los niveles de proteínas p15^INK4b y p27^KIP1 se regulan al alza después de 14 días de tratamiento. En el modelo de xenoinjerto COLO205, se observa una regresión tumoral incluso a una dosis de 0,3 mg/kg. A una dosis de 1 mg/kg, se obtiene una regresión completa en 4 de 6 ratones en los que el tumor degenera hasta el punto de que el volumen tumoral no es medible. [1] La administración a 0,1 mg/kg suprime casi por completo la artritis inducida por adyuvantes (AIA) y la artritis inducida por colágeno tipo II (CIA) en ratas Lewis o ratones DBA1/J, respectivamente. [2]

• Ensayo de quinasa en cascada Raf-MEK-ERK

  La proteína básica de mielina no fosforilada (MBP) se recubre en una placa de ELISA, y la forma activa de B-Raf/c-Raf se mezcla con MEK1/MEK2 no fosforilada y ERERK2 en 10 μM de ATP y 12,5 mM de MgCl₂ que contiene tampón MOPS en presencia de varias concentraciones de Trametinib (GSK1120212). La fosforilación de MBP se detecta mediante el anticuerpo anti-fosfo-MBP.

• Líneas celulares

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tiempo de incubación

  3 or 4 days

• Método

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to Trametinib (GSK1120212). Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Modelos animales

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosificaciones

  ~1 mg/kg/day

• Administración

  Orally