Trametinib DMSO solvate (GSK1120212B)

GSK1120212 inhibe la fosforilación de MBP independientemente del isotipo de Raf y MEK, con IC50 que van de 0,92 nM a 3,4 nM. GSK1120212 no demuestra inhibición de las actividades quinasa de c-Raf, B-Raf, ERK1 y ERK2. Además, GSK1120212 no muestra una actividad inhibidora drástica contra las otras 98 quinasas. GSK1120212 muestra una potente actividad inhibidora contra líneas celulares de cáncer colorrectal humano. Las células HT-29 y COLO205, que se sabe que tienen un mutante B-Raf constitutivamente activo, son las más sensibles a GSK1120212 con IC50 de 0,48 nM y 0,52 nM, respectivamente. Las líneas celulares que portan una mutación K-Ras muestran un amplio rango de sensibilidad a GSK1120212 con IC50 de 2,2-174 nM. En contraste, las células COLO320 DM, que portan el gen de tipo salvaje tanto en B-Raf como en K-Ras, resultan ser resistentes a GSK1120212 incluso a 10 μM. El tratamiento con GSK1120212 durante 24 horas induce la detención del ciclo celular en la fase G1 en todas las líneas celulares sensibles. Consistentemente, el tratamiento con GSK1120212 conduce a la regulación al alza de p15INK4b y/o p27KIP1 en la mayoría de las líneas celulares de cáncer colorrectal. GSK1120212 inhibe la fosforilación constitutiva de ERK en todas las líneas celulares sensibles. GSK1120212 induce apoptosis tanto en células HT-29 como en COLO205, pero las células COLO205 son más sensibles a GSK1120212 que las células HT-29 en términos de inducción de apoptosis.[1] GSK1120212 bloquea la producción de factor de necrosis tumoral-α e interleucina-6 de las células mononucleares de sangre periférica (PBMC).[2]

La administración oral de GSK1120212 a 0,3 mg/kg o 1 mg/kg una vez al día durante 14 días es eficaz para inhibir el crecimiento del xenoinjerto HT-29, y 1 mg/kg de GSK1120212 bloquea casi por completo el aumento del tumor. La fosforilación de ERK1/2 se inhibe completamente en los tejidos tumorales establecidos mediante una dosis oral única de 1 mg/kg de GSK1120212, y los niveles de proteína p15INK4b y p27KIP1 se regulan al alza después de 14 días de tratamiento con GSK1120212. En el modelo de xenoinjerto COLO205, se observa una regresión tumoral incluso a una dosis de 0,3 mg/kg. A una dosis de 1 mg/kg, se obtiene una regresión completa en 4 de 6 ratones en los que el tumor degenera hasta el punto de que el volumen tumoral no es medible.[1] La administración de GSK1120212 a 0,1 mg/kg suprime casi por completo la artritis inducida por adyuvante (AIA) y la artritis inducida por colágeno tipo II (CIA) en ratas Lewis o ratones DBA1/J, respectivamente.[2]

• Ensayo de quinasa en cascada Raf-MEK-ERK

  La proteína básica de mielina (MBP) no fosforilada se recubre en una placa de ELISA, y la forma activa de B-Raf/c-Raf se mezcla con MEK1/MEK2 no fosforilada y ERERK2 en 10 μM de ATP y 12,5 mM de MgCl2 que contiene tampón MOPS en presencia de varias concentraciones de GSK1120212. La fosforilación de MBP se detecta mediante el anticuerpo anti-fosfo-MBP.

• Líneas celulares

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320 cells

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  3 or 4 days

• Método

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to GSK1120212. Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Modelos animales

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosificaciones

  ~1 mg/kg/day

• Administración

  o.g.