CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

N.º de catálogoS5001 Lote:S500113

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Datos técnicos

Fórmula

C16H20N6O.C6H8O7
Peso molecular 504.49 Número CAS 540737-29-9
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción El citrato de tofacitinib (CP-690550, Tasocitinib) es un nuevo inhibidor de JAK con una IC50 de 1 nM, 20 nM y 112 nM contra JAK3, JAK2 y JAK1, respectivamente. También tiene actividad Anti-infection.
Objetivos
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
In vitro El citrato de Tofacitinib inhibe la proliferación de blastos de células T humanas mediada por IL-2 y la expresión de CD69 inducida por IL-15 con IC50 de 11 nM y 48 nM, respectivamente. El citrato de Tofacitinib previene la reacción linfocitaria mixta con una IC50 de 87 nM. El tratamiento de células Patersen-receptor de eritropoyetina (FDCP-EpoR) murinas dependientes de factores que albergan JAK2 humano de tipo salvaje o V617F con citrato de Tofacitinib conduce a la prevención de la proliferación celular con IC50 de 2,1 µM y 0,25 µM, respectivamente. El citrato de Tofacitinib inhibe la fosforilación de STAT1 y STAT3 inducida por interleucina-6 con IC50 de 23 nM y 77 nM, respectivamente. Además, el citrato de Tofacitinib genera un efecto proapoptótico significativo en células FDCP-EpoR murinas que portan JAK2VV617F, mientras que se observa un efecto menor para las células que portan JAK2 de tipo salvaje. Esta actividad está acoplada con la inhibición de la fosforilación de los efectores de señalización descendentes clave dependientes de JAK2V617F, el transductor de señal y activador de transcripción (STAT)3, STAT5, y el homólogo del oncogén viral del timoma murino v-akt (AKT). Además, el citrato de Tofacitinib previene la expresión de CD69 inducida por IL-15 en células NK y células T CD8+ humanas y de macaco cangrejero in vitro.
In vivo El citrato de Tofacitinib disminuye una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado y prolonga la supervivencia del aloinjerto cardíaco en modelos murinos. Además, el tratamiento con citrato de Tofacitinib de progenitores eritroides expandidos ex vivo de pacientes con PV positivos para JAK2V617F da como resultado una actividad antiproliferativa específica (IC50 = 0,2 μM) y proapoptótica. En contraste, los progenitores expandidos de controles sanos son menos sensibles al citrato de Tofacitinib en ensayos de proliferación (IC50 > 1,0 μM) y apoptosis. Durante 2 semanas de dosificación con citrato de Tofacitinib a 10 y 30 mg/kg/d, se observa una disminución significativa y dependiente del tiempo en el número de células NK en relación con el tratamiento con el vehículo. El número de células CD8+ de memoria efectora en el grupo tratado con citrato de Tofacitinib es un 55% menor que el observado en animales tratados con el vehículo.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Ensayos enzimáticos

    Los ensayos de quinasa JAK1, JAK2 y JAK3 utilizan una proteína expresada en células SF9 infectadas con baculovirus (una proteína de fusión de GST y el dominio catalítico de la enzima JAK humana) purificada por cromatografía de afinidad en glutatión-Sepharose. El sustrato para la reacción es ácido poliglutámico-tirosina [PGT (4:1)], recubierto en placas Nunc Maxi Sorp a 100 μg/mL durante la noche a 37 °C. Las placas se lavan tres veces y se añade la enzima JAK a los pocillos, que contenían 100 μL de tampón de quinasa (50 mM HEPES, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM de ortovanadato de sodio. Para CP-690550 (Tofacitinib) Citrate, también se añade para el ensayo de quinasa a diferentes dosis. Después de la incubación a temperatura ambiente durante 30 min, las placas se lavan tres veces. El nivel de tirosina fosforilada en un pocillo dado se determina mediante un ensayo ELISA estándar utilizando un anticuerpo anti-fosfotirosina.
Ensayo celular:

[2]
  • Líneas celulares

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • Concentraciones

    0-4 μM

  • Tiempo de incubación

    72 hours

  • Método

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
Estudio en animales:

[2]
  • Modelos animales

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • Dosificaciones

    10, 30 mg/kg/d

  • Administración

    Oral gavage

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

Validación de productos por parte del cliente

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Datos de [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

Sellecks CP-690550 (Tofacitinib) Citrate Ha sido citado por 198 Publicaciones

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

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