Tanespimycin (17-AAG)

La Tanespimicina (17-AAG), un análogo de la geldanamicina, exhibe una afinidad de unión más de 100 veces mayor por Hsp90 derivada de células cancerosas que sobreexpresan HER-2 (BT474, N87, SKOV3 y SKBR3) o células de carcinoma mamario BT474 con valores de IC50 de 5-6 nM. [1] Este compuesto causa la degradación de HER2, HER3, Akt y tanto el receptor de andrógenos (AR) mutante como el de tipo salvaje, lo que lleva a la detención del crecimiento G1 dependiente de RB de células de cáncer de próstata como LNCaP, LAPC-4, DU-145 y PC-3 con valores de IC50 de 25-45 nM. [2] Además de inducir la apoptosis de células Ba/F3 transformadas con BCR-ABL de tipo salvaje con una IC50 de 5,2 μM, tiene la capacidad de inducir la apoptosis de células transformadas con los mutantes BCR-ABL T315I y E255K con valores de IC50 de 2,3 μM y 1,0 μM, respectivamente, al inducir la degradación de la proteína BCR-ABL de tipo salvaje y de los mutantes. [3]

La Tanespimicina (17-AAG) muestra una afinidad de unión significativamente mayor por Hsp90 de xenoinjertos 3T3-src, B16 o CT26 en ratones desnudos con valores de IC50 de 8-35 nM en comparación con la de los tejidos normales con valores de IC50 de 200-600 nM. [1] La administración de este compuesto (~50 mg/kg) provoca una disminución significativa de la expresión de AR, HER2, HER3 y Akt de manera dosis-dependiente con una disminución >50% a la dosis de 50 mg/kg, lo que resulta en la inhibición dosis-dependiente del crecimiento de xenoinjertos de cáncer de próstata dependientes de andrógenos (CWR22) e independientes (CWR22R y CWRSA6) en un 67%, 80% y 68% a la dosis de 50 mg/kg, respectivamente. [2]

• Ensayos de unión a Hsp90

  La proteína Hsp90 nativa purificada o los lisados celulares de células cancerosas con sobreexpresión de HER-2 (BT474, N87, SKOV3 y SKBR3) o células de carcinoma mamario BT474 en tampón de lisis (20 mM HEPES, pH 7.3, 1 mM EDTA, 5 mM MgCl₂, 100 mM KCl) se incuban con varias concentraciones de Tanespimycin (17-AAG) durante 30 minutos a 4 °C, y luego se incuban con biotina-GM unida a perlas magnéticas de estreptavidina BioMag durante 1 hora a 4 °C. Los tubos se colocan en un soporte magnético y se retira el sobrenadante no unido. Las perlas magnéticas se lavan tres veces en tampón de lisis y se calientan durante 5 minutos a 95 °C en tampón de muestra SDS-PAGE. Las muestras se analizan en geles de proteínas SDS y se realizan western blots utilizando los anticuerpos indicados. Las bandas en los western blots se cuantifican utilizando el Bio-rad Fluor-S MultiImager y se calcula el porcentaje de inhibición de la unión de Hsp90 a la biotina-GM. La IC50 reportada es la concentración de este compuesto necesaria para causar una inhibición semimáxima de la unión.

• Líneas celulares

  BT474, SKBR3, N87, SKOV3, MCF7, MDA468, Hs578T, Hs578Bst, A549, HT29, U87, SKMG3, HT1080, RPTEC, NDF, HMVEC, HMEC, HUVEC, and PBMC cells

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tiempo de incubación

  5 days

• Método

  Cells are seeded in 96-well plates at 2,000 cells per well in a final culture volume of 100 μL for 24 hours before the addition of increasing concentrations of Tanespimycin (17-AAG), which is incubated for 5 days. Viable cell number is determined using the Celltiter 96 AQueous Nonradioactive Cell Proliferation Assay. The value of the background absorbance at 490 nm (A₄₉₀) of wells not containing cells is subtracted. Percentage of viable cells = (A₄₉₀ of this compound treated sample/A₄₉₀ untreated cells) × 100. The IC50 is defined as the concentration that gave rise to 50% viable cell number.

• Modelos animales

  Male nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-dependent CWR22 xenograft, and female nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-independent xenografts CWR22R and CWRSA6

• Dosificaciones

  ~50 mg/kg

• Administración

  Injection i.p.