T0070907

T0070907 es un potente y selectivo antagonista de PPARγ. Con una afinidad de unión aparente de 1 nM, este compuesto modifica covalentemente PPARγ en la cisteína 313 en la hélice 3 del PPARγ2 humano. Bloquea la función de PPARγ tanto en ensayos de genes reporteros basados en células como en ensayos de diferenciación de adipocitos. De acuerdo con su papel como antagonista de PPARγ, este compuesto químico bloquea el reclutamiento de péptidos derivados de coactivadores inducido por agonistas a PPARγ en un ensayo homogéneo basado en fluorescencia resuelta en el tiempo y promueve el reclutamiento del correpresor transcripcional NCoR a PPARγ tanto en ensayos de "pull-down" de glutatión S-transferasa como en un ensayo de "gel shift" dependiente de PPARγ/receptor X de retinoides (RXR) α. Los estudios con receptores mutantes sugieren que modula la interacción de PPARγ con estas proteínas cofactor afectando la conformación de la hélice 12 del dominio de unión a ligando de PPARγ. Curiosamente, mientras que el reclutamiento de NCoR inducido por T0070907 al heterodímero PPARγ/RXRα puede ser casi completamente revertido por el tratamiento simultáneo con el agonista de RXRα LGD1069, el tratamiento con este compuesto tiene solo efectos modestos en el reclutamiento de coactivadores inducido por LGD1069 al heterodímero PPARγ/RXRα. [1] Este tratamiento químico inhibe la proliferación, la invasión y la migración, pero no afecta significativamente la apoptosis. La inhibición molecular utilizando un receptor dominante negativo (Δ462) produce resultados similares. También media una disminución dosis-dependiente en la fosforilación de PPARγ y su capacidad para unirse al ADN, y puede afectar directamente la señalización de la proteína quinasa activada por mitógenos. [2]

El preacondicionamiento con lipopolisacárido atenúa significativamente el desarrollo de disfunción renal, lesión hepatocelular e insuficiencia circulatoria, así como el aumento de los niveles plasmáticos de interleucina-1 [beta] causado por endotoxemia grave. Este compuesto puede atenuar todos estos efectos beneficiosos proporcionados por el preacondicionamiento con lipopolisacárido [3]

• Ensayo de unión de ligandos

  Para determinar la afinidad de unión de T0070907 a los PPAR, se realiza un ensayo de proximidad por centelleo (SPA) con las siguientes modificaciones. Una reacción de 90 μl contiene tampón SPA (10 mM KH₂PO₄, 10 mM KH₂PO₄, 2 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM ditiotreitol, 2 mM CHAPS, 10% (v/v) glicerol, pH 7,1), 50 ng de GST-PPARγ (o 150 ng de GST-PPARα, GST-PPARδ), 5 nM de radioligandos marcados con ³H y 5 μl de este compuesto en Me₂SO. Después de la incubación durante 1 h a temperatura ambiente, se añaden 10 μl de perlas SPA recubiertas de polilisina (a 20 mg/ml en tampón SPA), y la mezcla se incuba durante 1 h antes de la lectura en Packard Topcount.

• Líneas celulares

  MCF-7 cells

• Concentraciones

  20 μM and higher concentrations

• Tiempo de incubación

  48 h

• Método

  MTS assay

• Modelos animales

  Preconditioning is performed by administering a low dose (1 mg/kg) of Escherichia coli LPS (serotype 0.127:B8) intraperitoneally 24 hr before the induction of severe endotoxemia.

• Dosificaciones

  1 mg/kg

• Administración

  intraperitoneally