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In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble. * Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes. * Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)
Preparación de soluciones madre
Actividad biológica
Descripción
Suplatast Tosylate (IPD-1151T, Suplatast Tosilate) es un novedoso agente antiasmático capsular que suprime tanto la producción de IgE como la síntesis de IL-4 e IL-5 con una IC50 superior a 100 μM.
Objetivos
IL-4 (Cell-free assay)
IL-5 (Cell-free assay)
>100 μM
>100 μM
In vitro
El Suplatast tosilate tiene un efecto inhibidor sobre la producción de anticuerpos en células B esplénicas de ratón aisladas y en células B de sangre periférica humana con un IC50 >100 nM. El Suplatast tosilate inhibe la producción de citocinas de ratón y humana, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10 con un IC50 >100 nM. La inducción de la síntesis de IgE dependiente de Cryj1 mediada por SN-4 se suprime de forma dependiente de la concentración por Suplatast tosilate (1 y 10 µg/ml) en células B autólogas. La producción de IL-4, tanto estimulada por SN-4 con Cryj1 en presencia de APC autólogas durante 3 días como producida por PBMC estimuladas con PHA de donantes normales, se inhibe eficazmente de forma dependiente de la concentración por Suplatast tosilate (1 y 10 μg/mL). El Suplatast tosilate inhibe significativamente la expresión de CD1a, CD80 y CD86 en células dendríticas inmaduras (DCs) y de CD1a, CD80, CD83 y CD86 en DCs maduras. El Suplatast tosilate también inhibe significativamente la secreción de CCL17, IL-12p70 e IL-12p40; sin embargo, la secreción de IL-10 no se ve afectada. Las respuestas proliferativas de las células T CD4(+) alogénicas a las DCs tratadas con Suplatast tosilate se suprimen. Además, las DCs tratadas con Suplatast tosilate tienen una capacidad alterada para estimular a las células T CD4(+) a producir IFN-gamma e IL-5.
In vivo
El Suplatast tosilate (100 mg/kg/100 μL) reduce significativamente el número total de células y eosinófilos en el BALF (alrededor del -40%) y casi inhibe completamente el desarrollo de BHR inducida por antígeno. Los hallazgos histológicos confirman la reducción de la infiltración celular submucosa en el pulmón y revelan la marcada inhibición del daño de las células epiteliales bronquiales. La IgE específica de ovalbúmina se reduce ligeramente pero significativamente. Los niveles de IL-4, IL-5 e IL-13 en el BALF disminuyen significativamente en ratones tratados con Suplatast tosilate en comparación con los de ratones no tratados.
Los cultivos para la producción de citocinas se preparan a 37 °C de la siguiente manera: las mezclas de SN-4 y APC autólogo (cada una 1 × 105 células/pozo) se cultivan durante 3 días con 50 μg/mL de Cry j1 en un volumen total de 0,2 mL en microplacas de fondo redondo; las PBMC (2 × 10 5 células/pozo) de donantes normales se cultivan durante 24 horas con 10 μg/ml de PHA en un volumen total de 0,2 mL en microplacas de 96 pozos de fondo plano; y las células T purificadas (1 × 105 células/pozo) de donantes normales se cultivan en un volumen total de 1 ml durante 24 horas con anti-CD3 mAb que se han inmovilizado en placas de 24 pozos de fondo plano a una concentración de 5 µg/ml. Las citocinas en los sobrenadantes de cultivo se analizan cuantitativamente mediante los siguientes kits disponibles comercialmente: IL-4 e IFN-γ. La sensibilidad del ensayo es de 30 pg/mL para IL-4 y 1 U/mL para IFN-γ.
Allogeneic responder CD4+ T cells obtained from healthy subjects are purified from PBMCs by negative depletion of CD14+, CD16+, CD19+, CD56+, and CD8+ cells using magnetic cell separation system micro-beads and columns. After 7 days of culture with GM-CSF and IL-4, iDCs differentiated from monocytes in the presence or absence of Suplatast tosilate (10 and 100 mg/ mL) are co-cultured with purified 1×10 5 allogeneic CD41 T cells at varying ratios of iDCs in 96-well round bottomed culture plates for 5 days. Cells are pulsed with 1 μCi of 3H-methylthymidine for the last 8 hours of the culture period. Incorporated radioactivity is counted with a liquid scintillation counter, and proliferative responses are expressed as the mean 3 H-methylthymidine incorporation (counts per minutes) of triplicate wells_SEM. Proliferation of DCs alone or CD4+ T cells alone is also assessed.
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