Stattic

Stattic inhibe la unión de un péptido que contiene fosfotirosina derivado del receptor gp130 al dominio SH2 de STAT3 de una manera fuertemente dependiente de la temperatura. Este compuesto solo tiene un efecto muy débil sobre la unión de un péptido tirosina-fosforilado al dominio SH2 de la tirosina quinasa Lck. Y no inhibe la dimerización de otros dos factores de transcripción diméricos (c-Myc/Max y Jun/Jun). También inhibe los fosfopéptidos marcados con fluoresceína a los dominios SH2 de STAT1 y STAT5b. Este químico inhibe selectivamente la unión de ADN de los homodímeros de STAT3 a una concentración de 10 μM. Se ha demostrado que inhibe la fosforilación celular de STAT3 en Tyr705 con poco efecto sobre la fosforilación de STAT1 en Tyr701 (en células HepG2) o la fosforilación de JAK1, JAK2 y c-Src (en células MDA-MB-231 y MDA-MB-235S). Este compuesto aumenta la tasa apoptótica de las líneas celulares de cáncer de mama dependientes de STAT3. [1]

• Cribado de alto rendimiento y ensayos de polarización de fluorescencia

  El cribado se realiza a aproximadamente 30 °C. La especificidad de los resultados del cribado se valida en ensayos análogos para la unión de los compuestos de prueba a los dominios SH2 de STAT1, STAT5 y Lck. La concentración final de los componentes del tampón utilizados para todos los ensayos de FP es de 10 mM HEPES (pH 7,5), 1 mM EDTA, 0,1 % de Nonidet P-40, 50 mM NaCl y 10 % de DMSO. La ausencia de ditiotreitol es esencial para la actividad inhibidora. Las secuencias de los péptidos son: STAT3, 5-carboxifluoresceína-GY(PO₃H₂)LPQTV-NH₂; STAT1, 5-carboxifluoresceína-GY(PO₃H₂)DKPHVL; STAT5, 5-carboxifluoresceína-GY(PO₃H₂)LVLDKW; y Lck, 5-carboxifluoresceína-GY(PO₃H₂)EEIP. Para el análisis de especificidad a 30 °C, las proteínas se utilizan a 150 nM (STAT1, STAT3 y STAT5). Para el análisis de especificidad a 37 °C, las proteínas se utilizan a 370 nM (STAT3) o 100 nM (Lck). Las proteínas se incuban con los compuestos de prueba en tubos Eppendorf a las temperaturas indicadas durante 60 min antes de la adición de los respectivos péptidos marcados con 5-carboxifluoresceína (concentración final: 10 nM). Antes de la medición a temperatura ambiente, las mezclas se dejan equilibrar durante al menos 30 min. Los compuestos de prueba se utilizan en las concentraciones indicadas diluidas a partir de una solución madre 20× en DMSO. Las curvas de unión y las curvas de inhibición se ajustan con SigmaPlot. Todas las curvas de competición se repiten tres veces en experimentos independientes.

• Líneas celulares

  Ly3 cells

• Concentraciones

  ~2.5 μM

• Tiempo de incubación

  48 h

• Método

  MTS

• Modelos animales

  Ly3 parental NOD/SCID IL2R null xenograft

• Dosificaciones

  3.75 mg/kg every day

• Administración

  intra tumor