SP-96

N.º de catálogoS9658 Lote:S965801

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₅H₂₀FN₇O

Peso molecular

453.47

Número CAS

2682114-54-9

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

91 mg/mL (200.67 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.41 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

SP-96 es un inhibidor potente, selectivo y no competitivo del ATP de la Aurora B con una IC50 de 0,316 nM. Este compuesto puede utilizarse para la investigación del cáncer de mama triple negativo (TNBC).

Objetivos

Aurora B
(Cell-free assay)

0.316 nM

In vitro

SP-96 muestra una potencia sub-nanomolar en los ensayos enzimáticos de Aurora B (IC50 = 0,316 ± 0,031 nM). Este compuesto muestra una selectividad >2000 veces superior contra FLT3 y KIT, lo cual es importante para la hematopoyesis normal. La cinética enzimática de este inhibidor muestra una inhibición no competitiva del ATP, lo que lo convierte en un inhibidor de primera clase. Muestra una inhibición selectiva del crecimiento en el cribado NCI60, incluida la inhibición de MDA-MD-468, una línea celular de cáncer de mama triple negativo.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayo enzimático de Aurora Kinase B El ensayo de inhibición de la cinasa se realiza midiendo la actividad de la cinasa en un ensayo de microfluídica. Se monitoriza la separación de un producto fosforilado del sustrato. El ensayo se realiza utilizando un chip de 12 puntas en un Caliper EZ Reader II. La receta utilizada para el tampón de separación es 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. Las soluciones madre del compuesto (20 mM en DMSO) se diluyen en tampón de cinasa. Se transfiere 1 μL de la solución madre deseada a una placa de microtitulación de 384 pocillos. La enzima Aurora B se diluye en tampón de cinasa a una concentración de 2 nM. Se transfieren 5 μL de la mezcla enzimática a la placa de ensayo. Los inhibidores/enzima Aurora B se incuban durante 60 min con agitación suave. Se prepara una mezcla de sustrato que contiene ATP y péptido marcado con 5FAM disuelto en el tampón de cinasa descrito anteriormente. Se añaden 5 μL de la solución de sustrato a la placa de ensayo. Las concentraciones de trabajo son las siguientes: péptido (1,5 μM), ATP (190 μM) y este compuesto en diluciones de ½ log de 12 puntos (0,2 mM-0,632 nM). No se añade inhibidor para el control positivo, y no se añade enzima para el control negativo. Para el control de trabajo, se utiliza barasertib. El porcentaje de inhibición se mide comparando el péptido inicial con los picos de producto fosforilado.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares MCF-7 cells Concentraciones -- Tiempo de incubación 24 h Método The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayo enzimático de Aurora Kinase B
El ensayo de inhibición de la cinasa se realiza midiendo la actividad de la cinasa en un ensayo de microfluídica. Se monitoriza la separación de un producto fosforilado del sustrato. El ensayo se realiza utilizando un chip de 12 puntas en un Caliper EZ Reader II. La receta utilizada para el tampón de separación es 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. Las soluciones madre del compuesto (20 mM en DMSO) se diluyen en tampón de cinasa. Se transfiere 1 μL de la solución madre deseada a una placa de microtitulación de 384 pocillos. La enzima Aurora B se diluye en tampón de cinasa a una concentración de 2 nM. Se transfieren 5 μL de la mezcla enzimática a la placa de ensayo. Los inhibidores/enzima Aurora B se incuban durante 60 min con agitación suave. Se prepara una mezcla de sustrato que contiene ATP y péptido marcado con 5FAM disuelto en el tampón de cinasa descrito anteriormente. Se añaden 5 μL de la solución de sustrato a la placa de ensayo. Las concentraciones de trabajo son las siguientes: péptido (1,5 μM), ATP (190 μM) y este compuesto en diluciones de ½ log de 12 puntos (0,2 mM-0,632 nM). No se añade inhibidor para el control positivo, y no se añade enzima para el control negativo. Para el control de trabajo, se utiliza barasertib. El porcentaje de inhibición se mide comparando el péptido inicial con los picos de producto fosforilado.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
MCF-7 cells
Concentraciones
--
Tiempo de incubación
24 h
Método
The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32717530/

Sellecks SP-96 Ha sido citado por 1 Publicación

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]	PubMed: 37490918

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]

PubMed: 37490918

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