SNX-2112

El tratamiento de células BT-474 con 1 μM de SNX-2112 da como resultado una regulación a la baja de la expresión de HER2 dentro de 3 a 6 horas de exposición al fármaco con una pérdida casi completa de la expresión de HER2 a las 10 horas. El tratamiento con este compuesto también resulta en una disminución de la expresión total de Akt. Inhibe la proliferación celular con valores de IC50 que oscilan entre 10 y 50 nM, en células cancerosas BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 y H1650. Y estos efectos antiproliferativos están asociados con la hipofosforilación de Rb, la detención de G1 y niveles modestos de apoptosis. [1] Este químico se une competitivamente al sitio de unión del trifosfato de adenosina N-terminal de Hsp90. Induce la apoptosis a través de la escisión de la caspasa-8, -9, -3 y de la poli (ADP-ribosa) polimerasa. El compuesto inhibe la activación de Akt inducida por citocinas y la quinasa relacionada con la señal extracelular (ERK) y también supera las ventajas de crecimiento conferidas por la interleucina-6, el factor de crecimiento similar a la insulina-1 y las células estromales de la médula ósea. Inhibe la formación de tubos por células endoteliales de la vena umbilical humana a través de la abrogación de la vía eNOS/Akt e inhibe marcadamente la formación de osteoclastos a través de la regulación a la baja de ERK/c-fos y PU.1. [2] Las líneas celulares (ocho líneas celulares de osteosarcoma, neuroblastoma, hepatoblastoma y linfoma) estudiadas demuestran sensibilidad a este agente con valores de IC50 que oscilan entre 10 y 100 nM. Una dosis más alta (70 nM) exhibe una inhibición más prolongada y una mayor acumulación sub-G1. Los niveles observados de Akt1 y C-Raf se reducen marcadamente con el tiempo, junto con un aumento en la escisión de PARP. [3] Una investigación reciente indica que este compuesto induce autofagia de manera dependiente del tiempo y la dosis a través de la inhibición de Akt/mTOR/p70S6K. Induce una apoptosis y autofagia significativas en células de melanoma humano A-375, y puede ser un agente de terapia dirigida eficaz. [4]

SNX-2112 es un metabolito activo de los compuestos SNX-5542, que inhibe el crecimiento de células de mieloma múltiple (MM) y prolonga la supervivencia en un modelo murino de xenoinjerto, y el bloqueo de HSP90 por este compuesto no solo inhibe el crecimiento de células MM sino que también actúa en el microambiente de la médula ósea para bloquear la angiogénesis y la osteoclastogénesis. [2]

• Ensayo de desplazamiento de ATP

  Para el ensayo de desplazamiento por afinidad de proteínas, se genera una resina de afinidad basada en purinas incubando Sepharose ligada a ATP con lisado de células Jurkat (congeladas rápidamente y homogeneizadas en solución salina) a 4 °C. Luego se incuba con SNX-2112 durante 90 minutos. Las proteínas eluidas por este compuesto se resuelven mediante SDS-PAGE, se visualizan con tinción de plata y se extraen del gel para su identificación basada en MS. Brevemente, después de la decoloración y la digestión con tripsina, los péptidos se extraen con μC18 ZipTips y luego se eluyen y se depositan directamente en un objetivo de desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) de acero inoxidable convencional con una solución saturada de ácido α-ciano-4-hidroxicinámico en 50 % de acetonitrilo, 0.15 % de ácido fórmico. Luego se adquieren espectros de masas utilizando un analizador de proteómica MALDI-TOF/TOF 4700. Se adquieren espectros de MS (1.000 disparos por espectro), y los tres picos de cada uno con la mayor relación señal/ruido se envían automáticamente para el análisis de MS en tándem (3000 disparos por espectro). La energía de colisión es de 1 keV. Se utiliza aire como gas de colisión. La identificación de proteínas se realiza a partir de los datos de MS y MS en tándem utilizando el software GPS Explorer con el motor de búsqueda de la base de datos Mascot integrado.

• Líneas celulares

  BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 and H1650 cancer cells

• Concentraciones

  0-500 nM

• Tiempo de incubación

  24 hours

• Método

  Cell viability is determined by seeding 2-5 × 10³ cells per well in 96- well plates and treating with SNX-2112 24 hours after plating in complete medium (200 μL). Each drug concentration is tested in eight wells. Cells are assayed using the Alamar blue viability test after a 96-h incubation. Flow cytometry is done using nuclei stained with ethidium bromide and isolated via the Nusse protocol

• Modelos animales

  5 × 10⁶ MM.1S cells are inoculated subcutaneously in the Fox Chase SCID mice (6-7 weeks old).

• Dosificaciones

  20 or 40 mg/kg

• Administración

  SNX-5422 is administered orally 3 times per week, total 3 weeks.