SNS-314

En la línea celular de carcinoma colorrectal HCT116, con niveles de proteína p53 intactos o agotados, el mesilato de SNS-314 muestra una eficacia mejorada cuando se administra secuencialmente con otros agentes quimioterapéuticos estándar y las sinergias más profundas se identifican para los agentes que activan el punto de control del ensamblaje del huso. [2] Un estudio reciente muestra que este compuesto presenta una potente actividad antiproliferativa en células HCT116 e inhibe la formación de colonias en agar blando. [3]

El tratamiento secuencial con mesilato de SNS-314 24 horas después produce una inhibición significativa del 72,5 % del crecimiento tumoral de los xenoinjertos HCT116, mientras que este compuesto como agente único no produce una inhibición significativa del crecimiento tumoral HCT116. [2] En el modelo de xenoinjerto de cáncer de colon humano HCT116, la administración de 50 y 100 mg/kg de este químico produce una inhibición dosis-dependiente de la fosforilación de la histona H3, lo que indica una inhibición efectiva de Aurora-B in vivo. Además, los tumores HCT116 de animales tratados con este agente exhiben respuestas potentes y sostenidas, incluyendo la reducción de los niveles de histona H3 fosforilada, el aumento de la caspasa-3 y la aparición de un mayor tamaño nuclear. [3]

• Ensayo de Aurora-A Kinase

  La Aurora A de ratón humanizada (aminoácidos 107-403) se expresa en E. coli como se describió anteriormente. Para los ensayos de IC50, este compuesto se titula tres veces en DMSO y se diluye 12,5 veces en el tampón de ensayo (10 mM Tris HCl pH 7,2, 10 mM MgCl₂, 0,05% NaN₃, 0,01% Tween-20 y 0,1% BSA). Este químico se diluye luego 4 veces en tampón de ensayo que contiene Aurora A y FAM-PKAtide a concentraciones finales de 2 nM y 50 nM, respectivamente. La reacción de la quinasa se inicia añadiendo ATP en el tampón de ensayo a una concentración final de 10 mM y se incuba a 21 °C durante 25 minutos. Como control positivo, se añade DMSO en lugar de este compuesto y como control negativo se añade tampón de ensayo en lugar de Aurora A. Ambas reacciones de control se realizan por triplicado. Para detectar el PKAtide fosforilado, la reacción de la quinasa se combina con la solución de unión progresiva (1:400 Progressive Binding Reagent, 1 × Buffer A, Molecular Devices) en una proporción de 1:3. La mezcla se incuba durante 30 minutos a 21 °C y la placa se escanea en un Analyst AD con excitación a 485 nm y emisión a 530 nm. El porcentaje de actividad enzimática relativa se calcula normalizando el valor de mP para cada pozo al promedio del control positivo. Los valores de actividad enzimática relativa se grafican en función del logaritmo de la concentración del compuesto y los valores de IC50 se generan en el software GraphPad Prism utilizando un ajuste de curva de dosis-respuesta sigmoide. IC50

• Líneas celulares

  HCT116 SCR and HCT116 p53 RNAi cells

• Concentraciones

  ~125 nM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Viability is measured using the CellTiter-Blue cell viability assay. Cells are treated as described above, although with a 5-day incubation period. Cytotoxicity is determined by measuring intracellular ATP using the CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay. Cells are seeded in white 96-well tissue culture plates at a density of 1.5-2 × 10³ cells/well, and a serial dilution of SNS-314 is dosed in combination with fixed concentrations for a total of 72 hours. Viability is determined as the ratio between the ATP in treated cells versus control cells. Apoptosis is measured using the caspase-Glo 3/7 system. Cells are plated in white 96-well plates as described above and treated first with this compound for 24 hours, washed with 200 μL of 1× PBS, and fresh medium is added with the second agent for 24 hours.

• Modelos animales

  HCT116 cells are injected s.c. into the right flank of nu/nu mice.

• Dosificaciones

  ≤42.5 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p.