SN-38

SN-38, un metabolito biológicamente activo de CPT-11. Este compuesto provoca la inhibición más fuerte de la DNA topoisomerase I, seguido por CPT y luego CPT-11. CPT-11 desplaza la posición del ADN relajado de forma dosis dependiente en la dirección del ADN mellado, pero este compuesto y CPT no muestran efecto sobre la posición del ADN relajado. Inhibe la síntesis de ADN de forma dosis-dependiente y tiempo-dependiente. Los valores de IC50 respectivos de este químico, en la síntesis de ADN, son de 0,077 µM. El efecto inhibidor sobre la síntesis de ARN es menor que sobre la síntesis de ADN y no inhibe la síntesis de proteínas. Este metabolito causó frecuentes roturas de cadena sencilla de ADN en células P388. [1]

Después de la dosificación oral, las concentraciones máximas de este compuesto ocurren dentro de 1 hora, y el porcentaje de lactona no unida en plasma murino a 1000 ng/mL es de 3,4 +/- 0,67 %, mientras que a 100 ng/mL el porcentaje no unido es de 1,18 +/- 0,14 %. Las AUC de lactona en ratones con xenoinjertos de neuroblastoma humano son mayores que en animales no portadores de tumor. [2]

• Ensayo de Topoisomerase I

  Una unidad (la cantidad mínima para la relajación completa de 0,5 μg de ADN de SV40 bajo las condiciones de este estudio) de Topoisomerase I, 0,5 μL de los compuestos de prueba y 0,5 μg de ADN de SV40 se añaden secuencialmente al tampón de reacción, que se compone de 25 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM KCl, 5 mM MgCl₂, 0,25 mM sal disódica de EDTA, 0,25 mM ditiotreitol, 15 μg/mL de albúmina de suero bovino y 5 % de glicerol. Luego, la mezcla de reacción (50 μL) se incuba durante 10 min a 37 °C, y la reacción se termina mediante tratamiento con 7,5 μL de una solución que consiste en 1 % de dodecilsulfato de sodio, 20 mM de sal disódica de EDTA y 0,5 mg/mL de proteinasa K durante 30 min adicionales a 37 °C. Las muestras se mezclan con 5 μL del tampón de carga que contiene 10 mM de Na₂HPO₄, 31,3 % de sacarosa y 0,3 % de azul de bromofenol. El ADN relajado (forma Ir) se separa del ADN superenrollado (forma I) y mellado (forma II) mediante electroforesis en gel de agarosa al 0,8 % a 50 mA y 20 V durante 17 h en presencia de 2 μg/mL de CHQ, 10 mM de EDTA, 30 mM de NaH₂PO₄ y 36 mM de Tris-HCl (pH 7,8). Después de la electroforesis, el gel se tiñe con 0,05 % de bromuro de etidio y se fotografía con luz UV (302 nm). La cantidad de ADN se cuantifica usando un densitómetro.

• Líneas celulares

  A-172, U-87, and LA-567

• Concentraciones

  0 -1000 nM

• Tiempo de incubación

  48 h

• Método

  MTT assay

• Modelos animales

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosificaciones

  10 mg/kg

• Administración

  i.v.