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Descripción biológica
| Especificidad | SLC22A2/OCT2 Antibody [D23A15] detecta niveles endógenos de proteína total SLC22A2/OCT2. |
|---|---|
| Antecedentes | SLC22A2, también conocido como Organic Cation Transporter 2 (OCT2), es un transportador facilitador poliespecífico (~63 kDa) de la familia SLC22. Predominantemente expresado en la membrana basolateral de las células del túbulo proximal renal, OCT2 presenta 12 dominios transmembrana que forman una cavidad de unión al sustrato orientada hacia el interior. Posee un gran bucle extracelular 2 que contiene sitios de glicosilación para la estabilidad conformacional, y residuos clave como Asp449 y Trp222 son críticos para el reconocimiento de cationes y la gestión de los estados de protonación durante el transporte. OCT2 opera a través de un mecanismo de acceso alterno, utilizando el gradiente electroquímico (típicamente -50 a -70 mV) sin requerir ATP o acoplamiento de Na⁺. Este transportador mueve cationes orgánicos, incluyendo metformina, cisplatino, histamina, dopamina y creatinina, bidireccionalmente, con un papel predominante en la captación basolateral hacia las células tubulares para la secreción vectorial. OCT2 muestra una ligera preferencia por cationes monovalentes más pequeños (Km 10–500 μM) y se basa en aperturas transitorias de poros desencadenadas por la oclusión del sustrato, lo que invierte la accesibilidad del sustrato. Las interacciones electrostáticas con aminas cargadas positivamente permiten la selectividad de los cationes, mientras que los aniones son excluidos. Esta actividad es crucial para la eliminación de toxinas sistémicas, neurotransmisores y para la disposición de xenobióticos en el hígado, las neuronas y la placenta. Las variantes comunes de OCT2 (por ejemplo, R270S, A270S) reducen la capacidad de transporte en un 20–50% para ciertos sustratos, aumentando el riesgo de nefrotoxicidad con quimioterapéuticos de platino y reduciendo la eficacia de la metformina en la diabetes. |
Información de uso
| Aplicación | IHC, FCM | Dilución |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Reactividad | Human | ||||||
| Fuente | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||||
| Tampón de almacenamiento | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Almacenamiento (Desde la fecha de recepción) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Referencias
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