Seletalisib (UCB-5857)

Seletalisib (UCB-5857) es un inhibidor potente, ATP-competitivo y selectivo de PI3Kδ capaz de bloquear la fosforilación de la proteína quinasa B (AKT) tras la activación del receptor de células B en una línea celular de células B. Además, inhibió la liberación de superóxido estimulada por el péptido N-formilo, pero no la estimulada por el acetato de forbol miristato, de neutrófilos humanos, lo que concuerda con una actividad específica de PI3Kδ. Los hallazgos de los ensayos celulares de inmunidad adaptativa demostraron que este compuesto bloquea la producción de varias citocinas por parte de las células T humanas a partir de células T activadas. Además, inhibió la proliferación de células B y la liberación de citocinas. En los ensayos con sangre total humana, el inhibidor suprimió la expresión de CD69 tras la activación de las células B y la degranulación de basófilos mediada por anti-IgE. De 239 quinasas cribadas, seletalisib a una concentración de 10 μM no mostró actividad inhibidora superior al 47% (MAP4K4) frente a enzimas quinasas no-PI3K. Frente a enzimas no-quinasas, mostró actividades débiles frente a la fosfodiesterasa (PDE)3A, PDE2A1 y PDE4D2, con una inhibición que varió entre el 32 y el 74% a 10 μM. Cuando se cribó a una concentración de 10 μM frente a 55 receptores y canales iónicos, la mayor actividad inhibidora observada fue del 20%. Un receptor, el receptor del neuropéptido Y (Y1), mostró una activación del 54%. Los ensayos de unión a receptores in vitro y los ensayos enzimáticos en una amplia gama de clases de dianas mostraron que es selectivo para PI3Kδ. El compuesto inhibió potentemente la fosforilación de AKT tras la estimulación con anti-IgM del BCR en células Ramos con un IC50 de 15 nM[1]. Cuando se perfiló en una amplia gama de sistemas de ensayo de células primarias, incluidos fibroblastos, células epiteliales, endoteliales y de músculo liso vascular, mostró una actividad significativa solo en aquellos sistemas que contenían linfocitos, lo que demuestra su selectividad funcional hacia las células que expresan PI3Kδ[2].

Seletalisib (UCB-5857) muestra una inhibición dosis-dependiente en un modelo de rata in vivo de liberación de interleucina 2 inducida por anticuerpos anti-CD3. El análisis de la relación entre la inhibición de la liberación de IL-2 y su concentración en sangre, utilizando datos combinados de varios experimentos, demostró que este compuesto tiene potentes efectos in vivo con un valor de IC50 estimado de <10 nM[1]. En los estudios de primer uso en humanos, los perfiles de concentración plasmática media en función del tiempo aumentaron con el aumento de la dosis después de una dosificación única y múltiple, sin desviaciones importantes de la proporcionalidad de la dosis. No hubo acumulación inesperada ni pérdida de exposición después de una dosificación múltiple (perfil farmacocinético (PK) independiente del tiempo) y los valores aparentes de t1/2 (aprox. 20h) respaldaron una dosificación una vez al día[2].

• Ensayos de actividad quinasa in vitro y perfilado de dianas no deseadas

  Las actividades de seletalisib (UCB-5857) y el inhibidor pan-PI3K UCB1370037 se probaron en ensayos de quinasa bioquímicos de las isoformas PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ y PI3Kγ (fabricadas internamente). Se realizaron ensayos competitivos de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) resueltos en el tiempo (TR) utilizando un kit de reactivos de ensayo de PI3K de cuatro pasos. En este ensayo, la actividad de PI3K se mide mediante la detección de fosfatidilinositol trifosfato (PIP3) de la siguiente manera: Se forma un complejo entre PIP3 biotinilado y una proteína con dominio de homología de pleckstrina (GST), que se detectan mediante estreptavidina-aloficocianina (APC) y un anticuerpo anti-GST marcado con europio, respectivamente. La proximidad de los dos fluoróforos da como resultado una señal TR-FRET estable. La producción de PIP3 no marcado por PI3K en la reacción de quinasa resulta en la inhibición competitiva del complejo y, por lo tanto, de la señal FRET. En resumen, se añadieron 2 μl del compuesto a los pocillos que contenían 8 μl de una mezcla que contenía sustrato de fosfatidilinositol bifosfato (PIP2) y ATP, antes de la adición de 10 μl de PI3K (prediluida a la concentración requerida). Las concentraciones finales de ATP y sustrato de PIP2 en el ensayo fueron de 2 μM y 10 μM, respectivamente. La concentración final de las enzimas PI3K en el ensayo fue de 1–8 nM, dependiendo de la actividad del lote. La concentración final de DMSO en el ensayo fue del 2,0%. La placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de la adición del tampón de parada y el tampón de detección según las instrucciones del fabricante, y luego la placa se incubó durante otras 6 horas a temperatura ambiente. Las mediciones de TR-FRET se realizaron en un lector de placas Analyst GT. La dependencia de la actividad de este compuesto con respecto a la concentración de ATP frente a PI3Kδ se estableció ejecutando el ensayo en presencia de concentraciones variables de ATP (2, 40, 200 y 1000 μM). Las concentraciones finales de PI3Kδ y sustrato de PIP2 en estos ensayos fueron de 1 nM y 25 μM, respectivamente.

• Líneas celulares

  Ramos B-cell line

• Concentraciones

  0.1 nM-10 μM

• Tiempo de incubación

  10 min

• Método

  Serially diluted seletalisib (UCB-5857) and goat anti-human F(ab)2 IgM in serum-free RPMI 1640 were added to Ramos cells plated in serum-free RPMI 1640. The plate was incubated for 10 minutes, chilled on ice, and the cells pelleted by centrifugation. Cellular phosphorylated AKT was detected by MSD assay.

• Modelos animales

  Adult Lewis rats (male, 6-8 weeks of age)

• Dosificaciones

  0.1-10 mg/kg in 500 μl volume

• Administración

  via oral gavage