MK-8776 (SCH 900776)

MK-8776 (SCH 900776) es un inhibidor menos potente de Chk2 y CDK2 con IC50 de 1,5 μM y 0,16 μM, respectivamente. No muestra una inhibición significativa de las isoformas microsomales hepáticas humanas del citocromo P450 1A2, 2C9, 2C19, 2D6 y 3A4. En combinación con un antimetabolito, este compuesto induce la acumulación de γ-H2AX en 2 horas, lo que indica un colapso de la horquilla de replicación y roturas de ADN de doble cadena. Además, suprime la acumulación de la autofosforilación de Chk1 pS296 de manera dosis-dependiente. La exposición de las células WS1 proliferantes a SCH 900776 se asocia con una acumulación rápida y dosis-dependiente de Chk1 pS345, lo que indica que las poblaciones de células normales en ciclo inducen Chk1 pS345 después de la exposición a este como parte de un ciclo fútil, quizás impulsado por las quinasas de la familia AT y la DNA-PK.[1]

La escalada de dosis de MK-8776 (SCH 900776) (16 mg/kg y 32 mg/kg) induce mejoras incrementales en la respuesta tumoral. Es importante destacar que las dosis de este compuesto asociadas con una robusta activación de biomarcadores y una mejor respuesta tumoral no están asociadas con una mayor toxicidad en los parámetros hematológicos en ratones BALB/c. [1]

• Ensayo de Chk1 SPA

  Un ensayo in vitro que utiliza His-Chk1 recombinante expresada en el sistema de expresión de baculovirus como fuente enzimática y un péptido biotinilado basado en CDC25C como sustrato. His-Chk1 se diluye a 32 nM en tampón de quinasa que contiene 50 mM Tris pH 8,0, 10 mM MgCl₂ y 1 mM DTT. El péptido CDC25C (péptido biotinilado CDC25 Ser216 C-terminal) se diluye a 1,93 μM en tampón de quinasa. Para cada reacción de quinasa, 20 μL de solución enzimática Chk1 de 32 nM y 20 μL de CDC25C de 1,926 μM se mezclan y combinan con 10 μL de MK-8776 (SCH 900776) diluido en 10% de DMSO, lo que da concentraciones finales de reacción de 6,2 nM Chk1, 385 nM CDC25C y 1% de DMSO después de la adición de la solución de inicio. La reacción se inicia mediante la adición de 50 μL de solución de inicio que consiste en 2 μM ATP y 0,2 μCi de ³³P-ATP, lo que da una concentración final de reacción de 1 μM ATP, con 0,2 μCi de ³³P-ATP por reacción. Las reacciones de quinasa se realizan durante 2 horas a temperatura ambiente y se detienen mediante la adición de 100 μL de solución de detención que consiste en 2 M NaCl, 1% H₃PO₄ y 5 mg/mL de perlas SPA recubiertas de estreptavidina. Las perlas SPA se capturan utilizando una placa de filtro GF/B de 96 pocillos y un recolector universal Filtermate. Las perlas se lavan dos veces con 2 M NaCl y dos veces con 2 M NaCl con 1% de ácido fosfórico. La señal se analiza luego utilizando un contador de centelleo líquido TopCount de 96 pocillos. Las curvas de respuesta a la dosis se generan a partir de diluciones en serie duplicadas de 8 puntos de este compuesto. Los valores de IC50 se derivan mediante análisis de regresión no lineal.

• Líneas celulares

  mESCs

• Concentraciones

  10 μM

• Tiempo de incubación

  1 h

• Método

  Cells were treated with MK-8776 (SCH 900776), other inhibitors, or vehicle for 1 hour.

• Modelos animales

  Female nude mice injected subcutaneously with A2780 or MiaPaCa2 cells

• Dosificaciones

  ~50 mg/kg

• Administración

  Administered intraperitoneally