SC79

SC79 suprime la translocación de la membrana plasmática de PH_AKTM-GFP y mejora la fosforilación de las tres isoformas de Akt en células HEK293, HeLa, HL60, NB4 y HsSulton (células B). Este compuesto reduce la excitotoxicidad neuronal y previene la muerte neuronal inducida por accidentes cerebrovasculares. [1] Restaura la proliferación de células con silenciamiento de BRAT1 y reduce la producción de superóxido en las mitocondrias de células MitoSox positivas. [2]

En el modelo murino de isquemia cerebral focal permanente, SC79 (0,04 mg/g, i.p.) permite la activación citosólica de Akt y recapitula la función celular primaria de la señalización de Akt, lo que resulta en una mayor supervivencia neuronal. [1]

• Fosforilación citosólica de Akt

  Las células Hela se privan de suero durante 1 hora y se tratan con IGF (100 ng/mL) o SC79 (4 μg/mL) durante 30 minutos. Las células se lisan en tampón de lisis que contiene 250 mM de sacarosa, 20 mM de HEPES, 10 mM de KCl, 1,5 mM de MgCl₂, 1 mM de EDTA, 1 mM de EGTA suplementado con inhibidores de proteasas. Las células se pasan a través de una aguja 25G varias veces y se mantienen en hielo durante 20 minutos. En este punto se toma el lisado celular total. Los lisados celulares se centrifugan a 100.000 g durante 30 minutos. El sobrenadante se recoge como la fracción citosólica. El pellet se lava con tampón de lisis y representa la fracción de membrana. El lisado celular total, las fracciones citosólica y de membrana se resuelven mediante SDS-PAGE y se analizan para fosfo-Akt (S473), Akt total, tubulina (marcador citosólico) y Orai1 (marcador de membrana) mediante Western Blot.

• Líneas celulares

  HsSultan and NB4 cells

• Concentraciones

  8 μg/mL

• Tiempo de incubación

  24 h

• Método

  HsSultan or NB4 cells (2.5 × 10⁵) are plated in a 24-well plate in 500 μL of phenol red-free RPMI medium supplemented with 10% FBS. After incubation for 24 hours, each compound (8 µg/mL) is added and cultured for overnight (16–20 h). Fifty microliters of MTT solution (5 mg/mL in PBS) are added to each well. Following 2 hrs incubation, the purple formazan crystals are dissolved by directly adding in 500 μL of isopropanol with 0.1 M HCl to each well. After clearing the cell debris by centrifugation, the absorbance is measured at a wavelength of 570 nm.

• Modelos animales

  Permanent focal cerebral ischemia mouse model

• Dosificaciones

  0.04 mg/g

• Administración

  i.p.