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SB1317/TG02 inhibe la proliferación de todas las líneas celulares probadas, incluidas las líneas celulares de tumores sólidos como colon (HCT-116, COLO205) y próstata (DU145) con IC50 de 33 nM, 72 nM y 140 nM, respectivamente. SB1317/TG02 inhibe potentemente el biomarcador CDK2 pRb (fosfo-Rb, proteína supresora de tumores de retinoblastoma) en HCT-116, y los efectos pueden detectarse a 40 nM con la fosforilación de proteínas completamente inhibida a 200 nM. SB1317/TG02 es potente contra pRb en células MV4-11 con IC50 de 0.13 μM y también inhibe pFLT3 y pSTAT5 en la misma línea celular. SB1317/TG02 resulta en una permeabilidad (Papp) de 26h en la dirección apical a basolateral (Papp,A→B) y en la dirección basolateral a apical (Papp,B→A) de 28.0 × 10^-6 cm/s y 27.4 ×10^-6 cm/s, respectivamente, en los ensayos de permeabilidad bidireccional Caco-2. Se encuentra que SB1317/TG02 es estable con una vida media de 45 min en microsomas hepáticos humanos (HLM), es moderadamente estable en DLM (t_1/2 = 33 min), y se elimina bastante rápidamente en MLM (t_1/22 = 12 min) y en RLM (t_1/2 = 11 min). [1] TG02 inhibe las isoformas de CDK más potentemente, inhibe CDK1, CDK2, CDK3, CDK5 y CDK9 con IC50 de 9 nM, 5 nM, 8 nM, 4 nM y 3 nM, respectivamente. TG02 también inhibe Lck, TYK2, Fyn, JAK2 y FLT3 con IC50 de 11 nM, 14 nM, 15 nM, 19 nM y 19 nM, respectivamente. TG02 tiene efectos antiproliferativos más potentes que SNS-032 en líneas celulares tumorales. TG02 muestra una inhibición más fuerte del panel de tumores líquidos con IC50 de 0.13 μM en comparación con el panel de tumores sólidos con IC50 de 0.30 μM. TG02 (100 nM) induce la detención del Cell Cycle y apoptosis en células MV4-11. TG02 inhibe pRb, pFLT3 y pSTAT5 con IC50 de 125 nM, 4.7 μM y 560 nM, respectivamente, en células MV4-11. TG02 inhibe pJAK2 (Y1007/8) y pSTAT3 con IC50 de 63 nM y 53 nM, respectivamente, en Karpas 1106P. La exposición a TG02 (300 nM) conduce a la inhibición de CDK9, seguida de la detención de la fase G1 y la inducción de apoptosis, en células HL-60. [2]

SB1317/TG02 se une fuertemente a proteínas plasmáticas en plasma humano, de ratón y de perro, con un PPB que oscila entre el 99,4% y el 99,9%. SB1317/TG02 muestra una biodisponibilidad oral (F) del 4% y 37% en ratas y perros, respectivamente. SB1317/TG02 (75 mg/kg, por vía oral) muestra una absorción rápida (t_max = 0,5 h) y una Cmax y AUC medias de 1029 ng/mL y 2523 ng•h/mL, respectivamente, con una vida media terminal media de 6,1 horas y una biodisponibilidad oral del 24% en ratones. SB1317/TG02 (75 mg/kg po q.d. 3×/semana) inhibe significativamente el crecimiento de tumores con un TGI medio del 82% en un modelo de xenoinjerto sc murino de cáncer de colon humano (HCT-116), mientras que la dosis más baja de 50 mg/kg po 3×/semana es marginalmente eficaz. SB1317/TG02 (75 mg/kg po, 15 mg/kg ip) inhibe significativamente el crecimiento de tumores con TGI medios del 42% y 63% para los métodos de administración oral e ip, respectivamente, en un modelo de xenoinjerto sc murino de linfoma de células B humano (Ramos). [1] TG02 (60 mg/kg) se retiene selectivamente a niveles supraterapéuticos e inhibe eficazmente CDK2, CDK9 y FLT3 in vivo, causando apoptosis en los tejidos tumorales, en tejidos tumorales en ratones nude portadores de tumores MV4-11. TG02 (10 mg/kg, 20 mg/kg y 40 mg/kg) conduce a una inhibición del crecimiento tumoral del 53%, 61% y 113%, respectivamente, en ratones nude portadores de tumores MV4-11. [2]

• Ensayos enzimáticos

  Todos los ensayos se realizan en microplacas blancas de 384 pocillos utilizando el sistema de ensayo PKLight. TG02 se prueba en ocho concentraciones preparadas a partir de una dilución en serie de 3 o 4 veces, comenzando en 10 μM. Para el ensayo de CDK2/ciclina A, la mezcla de reacción consta de los siguientes componentes en 25 μL de tampón de ensayo (50 mM Hepes, pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 5 mM BGP, 1 mM DTT, 0,1 mM ortovanadato de sodio), 1,4 μg/mL de complejo CDK2/ciclina A, 0,5 μM de sustrato RbING y 0,5 μM de ATP. La mezcla se incuba a temperatura ambiente durante 2 horas. Luego se añaden 13 μL de reactivo de detección de ATP PKLight y la mezcla se incuba durante 10 min. Las señales de luminiscencia se detectan en un lector de placas multietiqueta. Los otros ensayos de quinasa son similares, con las siguientes diferencias en los reactivos: Para los ensayos de FLT3, la mezcla contiene 2,0 μg/mL de enzima FLT3, 5 μM de sustrato poli(Glu,Tyr) y 4 μM de ATP. Para los ensayos de JAK2, la reacción contiene 0,35 μg/mL de enzima JAK2, 10 μM de sustrato poli(Glu,Ala,Tyr) y 0,15 μM de ATP. Se utiliza el software analítico Prism 5.0 para generar los valores de IC50 a partir de los datos.

• Líneas celulares

  HCT-116, COLO205 and DU145 cell lines

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  For proliferation assays in 96-well plates, 2×10⁵ cells are seeded in 100 μL of medium and treated the following day with TG02 (in triplicate) at concentrations up to 10 μM for 48 hours. Cell viability is monitored using the CellTiter-96 Aqueous One solution cell proliferation assay. Dose-response curves are plotted to determine IC50 values for TG02 using the XL-fit software.

• Modelos animales

  Murine sc xenograft model of human colon cancer (HCT-116)

• Dosificaciones

  75 mg/kg

• Administración

  orally