SB505124

SB505124 se identifica como un inhibidor reversible, competitivo de ATP y selectivo de ALK para ALK4 y ALK5. Este compuesto no muestra toxicidad para las células epiteliales renales A498 en concentraciones de hasta 100 μM durante 48 horas, y bloquea la apoptosis inducida por TGF-β de las células FaO y las células NRP 154 de manera dependiente de la concentración. [1] En células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC), este químico (500 nM) bloquea los cambios de TGF-β1 en el ensamblaje de actina F y previene la producción de ROS inducida por TGF-β. [2] Al inhibir la señalización de TGF-beta1, conduce a una disminución de la neurogénesis inducida por (DFO). [3] Un estudio reciente muestra que este inhibidor suprime la migración e invasión de células MCF-7-M5 de cáncer de mama. [4]

En un modelo de GFS en conejos, SB505124 disminuyó los niveles de presión intraocular (PIO) y redujo la infiltración celular subconjuntival y la cicatrización en el sitio quirúrgico del GFS. [5] En ratones tratados con (TAC) y ratones KO de FK12EC, este compuesto previene la activación de los receptores endoteliales de TGF-β y la inducción de hialinosis arteriolar renal. [6]

• Ensayo de proteína quinasa in vitro

  Los ensayos de quinasa se realizan como se describe por Laping et al., 2002 utilizando el dominio quinasa de ALK5 y GST-Smad3 de longitud completa fusionado en el N-terminal. Los ensayos de quinasa se realizan con 65 nM de GST-ALK5 y 184 nM de GST-Smad3 en 50 mM de HEPES, 5 mM de MgCl₂, 1 mM de CaCl₂, 1 mM de ditiotreitol y 3 μM de ATP. Las reacciones se incuban con 0,5 μCi de [³³P]γATP durante 3 horas a 30 °C. La proteína fosforilada se captura en papel P-81, se lava con 0,5 % de ácido fosfórico y se cuenta por centelleo líquido. Alternativamente, la proteína Smad3 o Smad1 también se recubre en microplacas básicas estériles FlashPlate. Los ensayos de quinasa se realizan luego en FlashPlates con las mismas condiciones de ensayo utilizando el dominio quinasa de ALK5 con Smad3 como sustrato o el dominio quinasa de ALK6 (receptor BMP) con Smad1 como sustrato. Las placas se lavan tres veces con tampón fosfato y se cuentan con TopCount.

• Líneas celulares

  A498, FaO and NRP 154 cells

• Concentraciones

  0-10 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Cell viability is measured as described by Laping et al., 2002 or by using the modified tetrazolium salt WST-1. XTT assay: The cells are serum-deprived for 24 hours and then treated with SB505124 for 48 hours to assess the cellular toxicity. Cell viability is determined by incubating cells for 4 hours with XTT labeling and electron coupling reagent according to the manufacturer's directions. Live cells with active mitochondria produce an orange-colored product, formazan, which is detected using a plate reader at between A450 nm and A500 nm with a reference wavelength greater than 600 nm. The absorbance values correlate with the number of viable cells. Modified tetrazolium salt WST-1: Approximately 2000 cells are seeded in 96-well dishes in 100 μL of 0.2% FBS phenol red-free media overnight. The cells are treated with 50 μL of this compound (to achieve the final concentrations indicated) for 30 minutes before being treated with or without TGF-β1 and TNF-α to a final volume of 200 μL. Cell growth is measured at the indicated time points by incubating each well with 10 μL of WST-1 for 3 hours at 37 °C. Metabolically active cells cleave WST-1 to water-soluble formazan, which is directly quantitated with an enzyme-linked immunosorbent assay plate reader. Each experiment is done at least twice, and treatment for each cell line is done in triplicate.

• Modelos animales

  New Zealand White (NZW) rabbits after glaucoma filtration surgery (GFS).

• Dosificaciones

  Tablets containing 5 mg of SB505124.

• Administración

  Administered via p.o.