SB415286

El SB 415286 inhibe la GSK3α de manera competitiva con el ATP con un K_i de 31 nM y muestra una potencia similar contra la GSK3β. Este compuesto tiene poca o ninguna actividad contra otras 24 proteínas quinasas con una IC50 > 10 μM. Estimula la síntesis de glucógeno en la línea celular hepática humana Chang con una EC50 de 2,9 μM, e induce la expresión de un gen reportero regulado por β-catenina-LEF/TCF en células HEK293. [1] Protege las neuronas del sistema nervioso central y periférico en cultivo de la muerte inducida por la reducción de la actividad de la vía PI3-quinasa de manera dependiente de la concentración, lo que se correlaciona con la inhibición de la actividad de GSK-3 y la modulación de los sustratos de GSK-3 tau y β-catenina. [2] En miotubos L6, este químico induce una activación mucho mayor de GS (6,8 veces) en comparación con la provocada por la insulina (4,2 veces) o el Li (4 veces). [3] Este compuesto (10 μM) inhibe la regulación negativa de la ciclina D1 inducida por rapamicina y bloquea la rapamicina y la apoptosis inducida, sugiriendo un papel crítico de GSK3β en la sensibilización mediada por rapamicina. [4] Previene la muerte celular inducida por el coxsackievirus de manera dosis-dependiente a través de la estabilización de β-catenina. [5] Este químico ejerce un efecto protector sobre la muerte celular inducida por peróxido de hidrógeno en células de neuroblastoma de rata B65 y neuronas, mientras que el litio no atenúa los efectos tóxicos del peróxido de hidrógeno. [7] Su tratamiento potencia la apoptosis inducida por TRAIL y CH-11 en células HepG2. [8] La inhibición de GSK-3 por este compuesto causa la detención del crecimiento y la apoptosis de las células de mieloma múltiple (MM) a través de la activación de la vía intrínseca. [9] Disminuye la viabilidad de las células Neuro-2A e induce la acumulación de células en la fase G2/M del ciclo celular y la apoptosis subsiguiente. [10]

La administración de SB 415286 (~10 mg/kg dos veces al día) reduce la extensión y el grado de la inflamación colónica provocada por el ácido trinitrobencenosulfónico (TNBS) en la rata, y reduce la caída del peso corporal, lo que está relacionado con la regulación a la baja de la actividad de NF-κB, implicada en la generación de mediadores proinflamatorios. [6] El tratamiento con este compuesto a 1 mg/kg retrasa significativamente el crecimiento de las células Neuro-2A in vivo en ratones atímicos. [10]

• Ensayo de actividad de GSK-3

  La actividad de la quinasa GSK-3 se mide, en presencia de varias concentraciones de SB 415286, en una mezcla de reacción que contiene las concentraciones finales de: 1 nM de GSK3α humana o GSK3α de conejo; 50 mM de MOPS pH 7.0; 0.2 mM de EDTA; 10 mM de Mg-acetato; 7.5 mM de L-mercaptoetanol; 5% (p/v) de glicerol; 0.01% (p/v) de Tween-20; 10% (v/v) de DMSO; 28 μM de sustrato peptídico GS-2. La secuencia peptídica GS-2 corresponde a una región de la glucógeno sintasa que es fosforilada por GSK-3. El ensayo se inicia con la adición de 0.34 μCi de [³³P]γ-ATP (determinaciones de IC50) o 2.7 μCi de [³³P]γ-ATP (determinaciones de Ki). La concentración total de ATP es de 10 μM (determinaciones de IC50) o varía de 0 a 45 μM (determinaciones de Ki). Después de 30 minutos de incubación a temperatura ambiente, el ensayo se detiene con la adición de un tercio del volumen del ensayo de 2.5% (v/v) de H₃PO₄ que contiene 21 mM de ATP. Las muestras se depositan en esterillas de fosfocelulosa P30 y se lavan seis veces en 0.5% (v/v) de H₃PO₄. Las esterillas de filtro se sellan en bolsas de muestra que contienen líquido de centelleo Wallac betaplate. La incorporación de 33P en el péptido sustrato se determina contando las esterillas en un contador de centelleo Wallac microbeta.

• Líneas celulares

  OPM-2, RPMI-8226, U-266, and INA-6

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tiempo de incubación

  48, or 72 hours

• Método

  Cells are exposed to different concentrations of SB 415286 for 48 or 72 hours in 96-flat well plates. After 48 or 72 hours, [³H]thymidine is added to the cultures (10 μCi/well) for the last 12 hours. The [³H]thymidine incorporation is evaluated by scintillation counting by using a top count β-counter. Apoptosis is assessed by annexin V/Propidium Iodide staining or by detection of mitochondrial membrane potential. Cell death is evaluated by the analysis of Forward/Side scatter fluorescence changes. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis is performed using a FACS-Calibur Cell Cytometer.

• Modelos animales

  Male Wistar rats with acute colitis provoked by trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)

• Dosificaciones

  ~1 mg/kg

• Administración

  Administered subcutaneously twice daily