Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424 inhibe potente y selectivamente la señalización y proliferación mediadas por JAK2V617F en células Ba/F3 y HEL. INCB018424 aumenta notablemente la apoptosis de forma dosis-dependiente en células Ba/F3. INCB018424 (64 nM) resulta en una duplicación de células con mitocondrias despolarizadas en células Ba/F3. INCB018424 inhibe la proliferación de progenitores eritroides de donantes normales y pacientes con policitemia vera con IC50 de 407 nM y 223 nM, respectivamente. INCB018424 demuestra una potencia notable contra la formación de colonias eritroides con IC50 de 67 nM. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, por vía oral, dos veces al día) da como resultado una tasa de supervivencia superior al 90% en el día 22 en un modelo de ratón impulsado por JAK2V617F. INCB018424 (180 mg/kg, por vía oral, dos veces al día) reduce marcadamente la esplenomegalia y los niveles circulantes de citocinas inflamatorias, y elimina preferentemente las células neoplásicas, lo que resulta en una supervivencia significativamente prolongada sin efectos mielosupresores o inmunosupresores en un modelo de ratón impulsado por JAK2V617F. [1] El criterio de valoración principal se alcanza en el 41,9% de los pacientes del grupo Ruxolitinib en comparación con el 0,7% en el grupo placebo en el ensayo doble ciego de mielofibrosis. Ruxolitinib da como resultado el mantenimiento de la reducción del volumen del bazo y una mejora del 50% o más en la puntuación total de los síntomas. [2] Un total del 28% de los pacientes del grupo Ruxolitinib (15 mg dos veces al día) tiene al menos una reducción del 35% en el volumen del bazo en la semana 48 en pacientes con mielofibrosis, en comparación con el 0% en el grupo que recibió la mejor terapia disponible. La longitud media palpable del bazo ha disminuido en un 56% con Ruxolitinib, pero ha aumentado en un 4% con la mejor terapia disponible en la semana 48. Los pacientes del grupo ruxolitinib tienen una mejora en las medidas generales de calidad de vida y una reducción de los síntomas asociados con la mielofibrosis. [3]

• Ensayo de unión

  Las proteínas recombinantes se expresan utilizando células Sf21 y vectores de baculovirus y se purifican mediante cromatografía de afinidad. Los ensayos de quinasa JAK utilizan un ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo homogéneo con el sustrato peptídico (-EQEDEPEGDYFEWLE). Cada reacción enzimática se lleva a cabo con Ruxolitinib o control, enzima JAK, 500 nM de péptido, trifosfato de adenosina (ATP; 1 mM) y 2% de dimetilsulfóxido (DMSO) durante 1 hora. La concentración inhibitoria al 50% (IC50) se calcula como la concentración de INCB018424 requerida para la inhibición del 50% de la señal fluorescente.

• Líneas celulares

  Ba/F3 and HEL cells

• Concentraciones

  3 μM

• Tiempo de incubación

  48 h

• Método

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Modelos animales

  JAK2V617F-driven mouse model

• Dosificaciones

  180 mg/kg

• Administración

  o.g.