RKI-1447

N.º de catálogoS7195 Lote:S719501

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Datos técnicos

Fórmula

C16H14N4O2S
Peso molecular 326.37 Número CAS 1342278-01-6
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 65 mg/mL (199.16 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 0.250mg/ml (0.77mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción RKI-1447 es un potente inhibidor de ROCK1 y ROCK2, con IC50 de 14,5 nM y 6,2 nM, respectivamente, y posee actividades antiinvasivas y antitumorales.
Objetivos
ROCK2
(Cell-free assay)		 ROCK1
(Cell-free assay)
6.2 nM 14.5 nM
In vitro

RKI-1447 es una piridiltiazolil-urea permeable a las células que actúa como un potente inhibidor de Rho Kinasa que se dirige al sitio de ATP, mostrando una potencia mucho menor contra PKA, PKN1/PRK1, p70S6K/RPS6kB1, AKT1, MRCKa/CDC42BPA (85,5%, 80,5%, 61,9%, 56,0% y 50,4% de inhibición, respectivamente, por 1 µM de este compuesto) u otras 15 quinasas. Las estructuras cristalinas del complejo de este químico/ROCK1 revelan que este inhibidor es un inhibidor de quinasa de Tipo I que se une al sitio de unión de ATP a través de interacciones con la región de la bisagra y el motivo DFG. Suprime la fosforilación de los sustratos de ROCK MLC-2 y MYPT-1 en células cancerosas humanas, pero no tuvo efecto sobre los niveles de fosforilación de las quinasas AKT, MEK y S6 a concentraciones tan altas como 10 μM. Este compuesto también es altamente selectivo para inhibir la reorganización del citoesqueleto mediada por ROCK (formación de fibras de estrés de actina) después de la estimulación con LPA, pero no afecta la formación de lamelipodios y filopodios mediada por PAK después de la estimulación con PDGF y bradicinina. Inhibe la migración, la invasión y el crecimiento tumoral independiente del anclaje de las células de cáncer de mama.

In vivo

RKI-1447 es altamente eficaz para inhibir el crecimiento de tumores mamarios en un modelo de ratón transgénico. Los tumores de ratones tratados con este compuesto aumentan de tamaño con un cambio porcentual promedio en el volumen tumoral de solo 8.8%. Así, inhibió el crecimiento del tumor mamario en un 87%, y en promedio, los tumores mamarios de Los ratones tratados con este producto químico son 7.7 veces más pequeños en comparación con los tumores de ratones tratados con el control del vehículo. Los tratamientos con este compuesto no provocan pérdida de peso en el ratón.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[2]
  • Ensayo de quinasa Z-Lyte FRET

    La inhibición de la quinasa se mide utilizando el ensayo de quinasa Z-Lyte® FRET de Invitrogen con el sustrato peptídico Ser/Thr 13 basado en la secuencia de la cadena ligera de miosina KKRPQRRYSNVF. Este compuesto se prueba en tres días separados con diluciones de 8 puntos realizadas por duplicado para determinar los valores promedio de IC50. Las condiciones del ensayo se optimizan a 15 μL de volumen de reacción de quinasa con 5 ng de enzima en 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA y 0.01% Brij-35. La reacción se incuba durante 1 h a temperatura ambiente en presencia de 1.5 μM de sustrato peptídico con 12.5 μM de ATP (para ROCK1) o 2 μM de sustrato con 50 μM de ATP (para ROCK2).
Ensayo celular:

[1]
  • Líneas celulares

    MDA-MB-231

  • Concentraciones

    ~600 μM

  • Tiempo de incubación

    72 h

  • Método

    Cells are plated in a 96 well tissue culture plate (1200 cells per well) and incubated for 24 hours. After incubation the cells are treated with vehicle or increasing concentrations of RKI-1447 for 72 hours. After incubation, freshly prepared MTT (2mg/ml) is added to each well and incubated for 3 hours. After incubation the plates are read at 540 nm.
Estudio en animales:

[1]
  • Modelos animales

    MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

  • Dosificaciones

    200 mpk/day

  • Administración

    i.p.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22846914/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23275831/

Validación de productos por parte del cliente

(d) ROCK inhibition blocks CC-RCC migration in a transwell assay. RCC10 or 786-O cells were treated with Y-27632, RKI 1447 or DMSO vehicle (as indicated) for 6 h. The assay was performed in duplicate and the experiment was repeated three times. Statistical analysis in (b-d) was performed using a paired t-test comparing each normalized dose to the negative control (*P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001); s.e.m.

Datos de [ , , Oncogene, 2016, 1-10. ]

Western blotting analysis of the indicated proteins in MSC-4H-FC cells treated with increasing concentrations of dasatinib, PF-573228, or RKI-1447 for 24 hours. β-Actin levels were used as loading control.

Datos de [ , , Neoplasia, 2018, 20(1):44-56 ]

The cells were treated with 5 μM of the PAK1-specific inhibitor IPA-3 or 1 μM of the ROCK1/2-specific inhibitor RKI-1447 for 24 h. Total cell lysates were immunoblotted with antibodies against p110β, p110δ, p-PAK1, PAK1, ROCK1, ROCK2, p-LIMK1, LIMK1 or β-actin, which served as an internal control. The results are representative of three independent experiments.

Datos de [ , , Anticancer Res, 2017, 37(4):1805-1818 ]

Sellecks RKI-1447 Ha sido citado por 12 Publicaciones

Therapeutic targeting of tumor spheroids in a 3D microphysiological renal cell carcinoma-on-a-chip system [ Neoplasia, 2023, 10.1016/j.neo.2023.100948] PubMed: 37944353
Correlating Basal Gene Expression across Chemical Sensitivity Data to Screen for Novel Synergistic Interactors of HDAC Inhibitors in Pancreatic Carcinoma [ Pharmaceuticals (Basel), 2023, 16(2)294] PubMed: 37259439
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
İnsan kornea endotel hücreleri üzerine farklı RHO kinaz inhibitörlerinin etkinliğinin araştırılması [ GCRIS, 2022, ] PubMed: none
Synapse-specific Lrp4 mRNA enrichment requires Lrp4/MuSK signaling, muscle activity and Wnt non-canonical pathway [ Cell Biosci, 2021, 11(1):105] PubMed: 34090516
RKI-1447 suppresses colorectal carcinoma cell growth via disrupting cellular bioenergetics and mitochondrial dynamics. [ J Cell Physiol, 2020, 235(1):254-266] PubMed: 31237697
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
[ Cell Rep, 2019, ] PubMed: 31825822
FUS-CHOP Promotes Invasion in Myxoid Liposarcoma through a SRC/FAK/RHO/ROCK-Dependent Pathway [Tornin J Neoplasia, 2018, 20(1):44-56] PubMed: 29190494
Prominent oncogenic roles of EVI1 in breast carcinoma [Wang H Cancer Res, 2017, 77(8):2148-2160] PubMed: 28209621

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