Regorafenib Hydrochloride

Regorafenib previene fuertemente la autofosforilación de VEGFR2 en células NIH-3T3/VEGFR2 con una IC50 de 3 nM. En HAoSMCs, regorafenib suprime la autofosforilación de PDGFR-β después de la estimulación con PDGF-BB, con una IC50 de 90 nM. Regorafenib también inhibe la señalización de FGFR en células de cáncer de mama (BC) MCF-7 estimuladas con FGF10. Regorafenib inhibió muy potentemente los receptores mutantes KIT^K642E y RET^C634W, con una IC50 de aproximadamente 20 nM y 10 nM, respectivamente. Regorafenib inhibe la proliferación de HUVEC estimuladas por VEGF¹⁶⁵, con una IC50 de aproximadamente 3 nM. Regorafenib previene la proliferación de HUVEC estimuladas por FGF2 y de HAoSMC estimuladas por PDGF-BB con una IC50 de 127 nM y 146 nM, respectivamente. [1] Regorafenib actúa sobre la proliferación de células tumorales y la vasculatura tumoral mediante la inhibición de los receptores de Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR y PDGFR) y de las serina/treonina quinasas (Raf y p38MAPK). [2] Regorafenib suprime el crecimiento de células humanas Hep3B, PLC/PRF/5 y HepG2 de manera dependiente de la concentración y el tiempo. [3]

Regorafenib revela una potente TGI dependiente de la dosis en varios modelos preclínicos de xenoinjertos humanos en ratones, con reducción del tamaño del tumor en modelos de carcinoma mamario MDA-MB-231 y renal 786-O. Regorafenib no solo previene el crecimiento de tumores mamarios primarios singénicos 4T1 que crecen ortotópicamente en la almohadilla grasa, sino que también suprime la formación de metástasis tumorales en el pulmón. [1]

• Ensayos de quinasas

  Se realizan ensayos in vitro utilizando dominios quinasa recombinantes de VEGFR2 (murino aa785–aa1367), VEGFR3 (murino aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) y BRafV600E (aa409–aa765). El perfilado inicial de la inhibición de quinasas in vitro se realiza a una concentración fija de 1 μM de Regorafenib. Los valores de concentración inhibitoria del 50 % (IC50) se determinan a partir de quinasas respondedoras seleccionadas, por ejemplo, VEGFR1 y RET. La inhibición de la quinasa TIE2 se mide con un ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea (HTRF) utilizando una proteína de fusión recombinante de glutatión-S-transferasa, el dominio intracelular de TIE2 y el péptido biotina-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG como sustrato.

• Líneas celulares

  GIST 882 and TT cells

• Concentraciones

  5-10 μM

• Tiempo de incubación

  96 h

• Método

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Modelos animales

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Dosificaciones

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Administración

  o.g.