Regorafenib (BAY 73-4506)

Regorafenib previene fuertemente la autofosforilación de VEGFR2 en células NIH-3T3/VEGFR2 con una IC50 de 3 nM. En HAoSMCs, este compuesto suprime la autofosforilación de PDGFR-β después de la estimulación con PDGF-BB, con una IC50 de 90 nM. También inhibe la señalización de FGFR en células de cáncer de mama (BC) MCF-7 estimuladas con FGF10. Este químico inhibió muy potentemente los receptores mutantes KIT^K642E y RET^C634W, con IC50 de aproximadamente 20 nM y 10 nM, respectivamente. Inhibe la proliferación de HUVECs estimuladas con VEGF¹⁶⁵, con una IC50 de aproximadamente 3 nM. Este compuesto previene la proliferación de HUVECs estimuladas con FGF2 y de HAoSMCs estimuladas con PDGF-BB con IC50 de 127 nM y 146 nM, respectivamente. [1] Se dirige tanto a la proliferación de células tumorales como a la vasculatura tumoral a través de la inhibición de los receptores de Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR y PDGFR) y serina/treonina quinasas (Raf y p38MAPK). [2] Este químico suprime el crecimiento de células humanas Hep3B, PLC/PRF/5 y HepG2 de manera dependiente de la concentración y el tiempo. [3]

Regorafenib revela un potente TGI dosis-dependiente en varios modelos preclínicos de xenoinjertos humanos en ratones, con reducción tumoral en modelos de carcinoma de mama MDA-MB-231 y renal 786-O. Este compuesto previene no solo el crecimiento de tumores primarios syngénicos de mama 4T1 que crecen ortotópicamente en la almohadilla grasa, sino que también suprime la formación de metástasis tumorales en el pulmón. [1]

• Ensayos de quinasas

  Se realizan ensayos in vitro utilizando los dominios quinasa recombinantes de VEGFR2 (murino aa785–aa1367), VEGFR3 (murino aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) y BRafV600E (aa409–aa765). El perfil inicial de inhibición de quinasas in vitro se realiza a una concentración fija de 1 μM de este compuesto. Los valores de concentración inhibidora del 50% (IC50) se determinan a partir de quinasas respondedoras seleccionadas, por ejemplo, VEGFR1 y RET. La inhibición de la quinasa TIE2 se mide con un ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea (HTRF) utilizando una proteína de fusión recombinante de glutatión-S-transferasa, el dominio intracelular de TIE2 y el péptido biotina-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG como sustrato.

• Líneas celulares

  GIST 882 and TT cells

• Concentraciones

  5 nM-10 μM

• Tiempo de incubación

  96 hours

• Método

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Modelos animales

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Dosificaciones

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Administración

  Orally