Refametinib (RDEA119)

N.º de catálogoS1089 Lote:S108902

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Datos técnicos

Fórmula

C19H20F3IN2O5S
Peso molecular 572.34 Número CAS 923032-37-5
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (174.72 mM)
Ethanol 100 mg/mL (174.72 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 5.000mg/ml (8.74mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 0.710mg/ml (1.24mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 14.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Refametinib (RDEA119, Bay 86-9766) es un inhibidor potente, no competitivo de ATP y altamente selectivo de MEK1 y MEK2 con IC50 de 19 nM y 47 nM, respectivamente.
Objetivos
MEK1
(Cell-free assay)		 MEK2
(Cell-free assay)
19 nM 47 nM
In vitro Refametinib (RDEA119) se une selectivamente y directamente a un bolsillo alostérico en las enzimas MEK1/2, y es altamente eficaz para inhibir la proliferación celular en varias líneas de células tumorales, incluyendo A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 y BxPC3. Inhibe el crecimiento dependiente del anclaje de líneas celulares de cáncer humano que albergan la mutación BRAF V600E con ganancia de función, con valores de GI50 que van de 67 a 89 nM. En condiciones independientes del anclaje, los valores de GI50 para todas las líneas celulares probadas son similares (40-84 nM). Este compuesto muestra una selectividad tisular que reduce su potencial de efectos secundarios relacionados con el sistema nervioso central. Inhibe potentemente la proliferación de las 4 líneas celulares que albergaban la mutación BRAF, pero tiene efectos nulos o modestos en las otras 4 células que albergaban BRAF de tipo salvaje (IC50 de 0,034-0,217 μM frente a 1,413-34,120 μM). El efecto inhibidor de Refametinib en las líneas celulares seleccionadas OCUT1 (BRAF V600E(+), PIK3CA H1047R(+)) y SW1376 (BRAF V600E(+)) se potencia mediante la combinación con el inhibidor de mTOR, temsirolimus. Tanto Refametinib como temsirolimus también muestran efectos sinérgicos sobre la muerte autofágica de las células OCUT1 y KAT18 probadas selectivamente.
In vivo La administración oral de RDEA119 a 50 mg/kg en un esquema de una vez al día durante 14 días conduce a una inhibición del 68 % del crecimiento tumoral (TGI) en el modelo tumoral de melanoma humano A375. Este compuesto a 25 mg/kg en un esquema de una vez al día durante 14 días da como resultado una TGI del 123 % en el modelo tumoral de carcinoma de colon humano Colo205 (una TGI > 100 % ocurre cuando el tumor se reduce por debajo de su volumen inicial). Una dosis de 25 mg/kg una vez al día durante 14 días produce una TGI del 56 % y 67 % para los tumores HT-29 y A431, respectivamente.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Ensayo de la quinasa MEK

    La ERK2 murina (mERK2) K52A/T183A inactiva para la quinasa se purifica por afinidad de Escherichia coli expresada utilizando el vector pET21a. La actividad de la quinasa MEK1 se determina utilizando mERK2 K52A T183A como sustrato. La enzima MEK1 recombinante (5 nM) se activa primero con 0,02 unidades o 1,5 nM de RAF1 en presencia de 25 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,2 mM EDTA y 50 μM ATP durante 30 minutos a 25 °C. Las reacciones se inician añadiendo 2 μM de mERK2K52A T183A y 2,5 μCi [γ-33P] ATP en un volumen total de 20 μL. La actividad de la quinasa MEK2 se determina de manera similar, excepto que no se necesita la activación por RAF1 y se utilizan 11 nM de enzima MEK2 (activa) en los ensayos. El perfilado de quinasas para Refametinib (RDEA119) se realiza por Invitrogen utilizando su servicio Select Screen Kinase Profiling. Se utiliza el ensayo bioquímico Z'-LYTE. Este compuesto se ensaya por cuadruplicado a 10 μM contra 205 quinasas.
Ensayo celular:

[1]
  • Líneas celulares

    A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 and BxPC3 cells

  • Concentraciones

    10-1000 nM

  • Tiempo de incubación

    48 hours

  • Método

    For anchorage-dependent growth inhibition experiments, cells are plated in white 384-well plates at 1,000/20 μL/well or white 96-well microplates at 4,000/100 μL/well. After 24-h incubation at 37 °C, 5% CO2, and 100% humidity, Refametinib (RDEA119) is incubated for 48 hours at 37 °C and assayed using CellTiter-Glo. For the 96-well anchorage-independent growth assay, wells of an “ultralow binding” plate (Corning) are filled with 60 μL of a 0.15% agarose solution in complete RPMI 1640. Then, 60 μL of complete RPMI 1640 containing 9,000 cells in 0.15% agarose are added per well. After 24 hour, 60 μL of a 3 × drug solution in agarose-free complete RPMI 1640 are added. After 7 d, 36 μL of 6 × 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)- 2H-tetrazolium, inner salt reagent are added per well. After 2 hours at 37 °C, absorbance at 490 nm is determined on the M5 plate reader.
Estudio en animales:

[1]
  • Modelos animales

    Female athymic nude mice are injected s.c. with A375, HT-29 and A431 tumor; male athymic nude mice with Colo205 tumor.

  • Dosificaciones

    25 or 50 mg/kg

  • Administración

    Orally once daily for 14 days

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19706763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21351275/

Validación de productos por parte del cliente

RDEA119 (1 µM) or JTP-74057 (0.1 µM) abolished the effects of G1 on DAPK1 and NR2B phosphorylation.

Datos de [ , , J Neurosci, 2012, 32(14): 4887-900 ]

Western blot analyses of downstream effector proteins of the MAPK signaling pathway. The panel of CRC cell lines was treated with or without refametinib (1 lM) for 72 h. a-Tubulin served as a loading control.

Datos de [ , , Mol Oncol, 2018, 12(8):1398-1409 ]

B: ERK and p-ERK1/2 levels in response to MEKi treatment. Tra = trametinib, Ref = refametinib, Sel = selumetinib, Bin = binimetinib. Films were intentionally overexposed to detect signal in lanes with low p-ERK1/2 expression. For each cell line all treatment conditions were performed as part of the same experiment. All experimental findings were confirmed in independent experiments performed in triplicate. Note: membranes incubated with p-ERK1/2 antibody were overexposed to capture all remaining signal after MEKi treatment. WB images have been cut to keep the same sample order. All membranes incubated with the same antibody have been exposed for the same period of time.

Datos de [ , , Am J Cancer Res, 2016, 6(10):2235-2251 ]

MEK inhibition of hypoosmolar-induced ADM. In all panels KrasG12D acinar explants were isolated and starved overnight. The next day explants were incubated with hypoosmotic (150 mOsm) medium for 5 min and then refametinib was added at the indicated concentrations. (A) HRP assay from two mice was performed immediately after the 5 min hypoosmotic treatment. Mean ± SD, two-tailed t-test. (B) Acinar explants were seeded in collagen and ADM was quantified at day 4. N = number of mice. Mean ± SD, two-tailed t-test. (C) Representative bright field images of acinar explants described in B. Dashed lines highlight acinar cell clusters, arrowheads: duct-like structures. Scale bars = 50 μm.

Datos de [ , , EBioMedicine, 2017, 15:90-99 ]

Sellecks Refametinib (RDEA119) Ha sido citado por 29 Publicaciones

System analysis links SMARCD3 regulons to growth signaling and MEK inhibitor response in everolimus-resistant ER+ breast cancer cells [ Cell Rep Med, 2025, 6(11):102425] PubMed: 41260207
Histone deacetylase inhibitors promote breast cancer metastasis by elevating NEDD9 expression [ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):11] PubMed: 36604412
Salmonella effector SopB reorganizes cytoskeletal vimentin to maintain replication vacuoles for efficient infection [ Nat Commun, 2023, 14(1):478] PubMed: 36717589
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, S2666-3791(23)00367-1] PubMed: 37734378
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, 4(10):101200] PubMed: 37734378
Protein Tyrosine Phosphatase Non-Receptor 11 (PTPN11/Shp2) as a Driver Oncogene and a Novel Therapeutic Target in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) [ Int J Mol Sci, 2023, 24(13)10545] PubMed: 37445722
Anatomic position determines oncogenic specificity in melanoma [ Nature, 2022, 604(7905):354-361] PubMed: 35355015
NOTCH signaling limits the response of Low Grade Serous Ovarian Cancers to MEK inhibition [ Mol Cancer Ther, 2022, MCT-22-0004] PubMed: 36198031
Secondary resistance to anti-EGFR therapy by transcriptional reprogramming in patient-derived colorectal cancer models [ Genome Med, 2021, 13(1):116] PubMed: 34271981
Targeting the PI3K and MAPK pathways to improve response to HER2-targeted therapies in HER2-positive gastric cancer [ J Transl Med, 2021, 19(1):184] PubMed: 33933113

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