Pomalidomide (CC-4047)

Pomalidomide inhibe la liberación de TNF-alpha estimulada por lipopolisacáridos (LPS) en PBMC humanos y en sangre total humana con valores de IC50 de 13 nM y 25 nM, respectivamente. [1] Este compuesto inhibe el crecimiento de las células T reguladoras que es estimulado por IL-2 con una IC50 de ~1 μM. [2] El tratamiento con este químico (6,4 nM-10 μM) aumenta la producción de IL-2 en células T de sangre periférica humana, y es ligeramente más potente en el subconjunto CD4+ que en el subconjunto CD8+. Es significativamente más potente que CC-5013 en la elevación de los niveles de IL-2, IL-5 e IL-10, pero solo ligeramente más potente que CC-5013 en la elevación de los niveles de IFN-γ. Este agente mejora la actividad transcripcional de AP-1 inducida por las células SEE y Raji en las células Jurkat de manera dosis-dependiente, con una mejora máxima de 4 veces a 1 μM. [3] La exposición de las células Raji a diversas concentraciones de este compuesto (2,5-40 μg/mL) durante 48 horas conduce a una disminución significativa en la proliferación celular y la síntesis de ADN. Hay una reducción de aproximadamente el 40% en comparación con los controles tratados con vehículo. [4]

Pomalidomide mejora el efecto antitumoral de rituximab contra linfomas de células B en ratones inmunodeficientes combinados graves. La administración de este compuesto en combinación con rituximab, otorga a los ratones un período de supervivencia mediano de 74 días en comparación con los 58 días del tratamiento con CC5013/rituximab y los 45 días de la monoterapia con rituximab. El efecto sinérgico de este compuesto y rituximab puede ser completamente abrogado por la depleción de células NK, apoyando la propuesta de que la expansión de células NK es un mecanismo por el cual este compuesto puede aumentar la actividad antitumoral de rituximab. [4]

• Inhibición de la síntesis de TNF-α

  La actividad inhibidora de TNF-α se mide en PBMC estimuladas con lipopolisacárido (LPS). Pomalidomide se añade a los PBMC humanos 1 hora antes de la adición de LPS (1 μg/mL) y la incubación se continúa durante 18-20 horas adicionales. Posteriormente se recogen los sobrenadantes y la concentración de TNF-α en los sobrenadantes se determina mediante ELISA. La concentración de este compuesto que inhibe la producción de TNF en un 50 % (IC50) se calcula mediante análisis de regresión no lineal. El ensayo de inhibición de TNF en sangre total humana se realiza de manera similar al ensayo de PBMC, excepto que la sangre total humana fresca heparinada se siembra directamente en placas de microtitulación.

• Líneas celulares

  Raji, SU-DHL-4 and SU-DHL-10 cell lines

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations 2.5-40 μg/mL

• Tiempo de incubación

  24 or 48 hours

• Método

  For assessment of cell apoptosis, Lymphoma cell lines are exposed to Pomalidomide (5 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. The cells are stained with FITC-labeled Annexin V and propidium iodine. Cell apoptosis is analyzed by multicolor flow cytometric analysis using a fluorescence-activated cell sorter/FACStar Plus flow cytometer. Cells are scored as apoptotic if they are Annexin V–positive and propidium iodine–negative/positive (early and late apoptosis, respectively). For determination of cell proliferation, the Lymphoma cell lines are exposed to this compound (2.5, 5, 10, 20, and 40 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. 1 μCi per well (96-well plate) of [³H]-thymidine is added and cells are incubated for another 18 hours. Cells are then harvested using the Harvest system into the 96-well glass filters and [³H]-thymidine uptake is measured using an automated scintillation counter.

• Modelos animales

  Disseminated lymphoma-bearing SCID mice

• Dosificaciones

  0.5 mg/kg

• Administración

  Injection i.p.