Picropodophyllin (AXL1717)

En células intactas, el PPP inhibe eficazmente la fosforilación de IGF-1R, Akt (Ser 473) y Erk1/2 estimulada por IGF-1. Inhibe específicamente el crecimiento celular e induce la apoptosis en células tumorales IGF-1R-positivas cultivadas. [1] Este compuesto sensibiliza sinérgicamente las células HMCL, MM humanas primarias y 5T33MM murinas a ABT-737 y ABT-199 al disminuir aún más la viabilidad celular y mejorar la Apoptosis related. [3] También suprime sinérgicamente la proliferación y la motilidad de las células de carcinoma hepatocelular. [4]

En ratones SCID con xenoinjertos de ES-1, BE y PC3 humanas, Picropodophyllin (PPP) (20 mg/kg/12 h, i.p.) provoca una regresión tumoral completa. [1] Este compuesto también muestra una marcada actividad antitumoral y causa un aumento significativo en la supervivencia en el modelo de ratón 5T33MM. [2]

• Ensayos de tirosina quinasa in vitro.

  Se realiza el ensayo de fosforilación del sustrato pTG catalizada por IGF-1R, utilizando un kit de ensayo de tirosina quinasa en placa de 96 pocillos. Utilizamos el receptor recombinante del factor de crecimiento epidérmico, IR inmunoprecipitada de HEPG2, IGF-1R inmunoprecipitada de células P6, y el sobrenadante inmunodepletado de IGF-1R de P6 (que representa las “tirosina quinasas no IGF-1R”). Después de 30 minutos de tratamiento de los receptores con los compuestos deseados en el tampón de quinasa [tampón HEPES 50 mM (pH 7.4), 20 mM MgCl₂, 0.1 MnCl₂, y 0.2 Na₃VO₄], la reacción de la quinasa se activa mediante la adición de ATP. El sustrato polimérico fosforilado se sondea con un anticuerpo monoclonal específico de fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano, clon PT-66. El color se desarrolla con el sustrato cromogénico de peroxidasa de rábano dihidrocloruro de O-fenilendiamina y se cuantifica por espectrofotometría (lector ELISA). La autofosforilación de tirosina de IGF-1R se analiza mediante un ensayo ELISA sándwich. Brevemente, las placas de 96 pocillos se recubren durante la noche a 4°C con 1 μg/pocillo de un anticuerpo para la subunidad β de IGF-1R. Las placas se bloquean con 1% de BSA en PBS Tween durante 1 h, y luego se añaden 80 μg/pocillo de lisado proteico total de la línea celular P6. Como control negativo, utilizamos lisado proteico total de la línea celular R-. Los compuestos investigados se añaden en tampón de tirosina quinasa sin ATP a temperatura ambiente durante 30 min antes de la activación de la quinasa con ATP. El ensayo de quinasa se realiza utilizando el kit Sigma (véase más arriba). Después de la espectrofotometría, los valores de IC50 de los inhibidores se determinan utilizando la función REGRESSION del programa Statistica.

• Líneas celulares

  Melanoma cells (FM 55, SK-MEL-28, SK-MEL-5, C8161, DFB, DFW and AA), sarcoma cells (RD-ES), breast carcinoma cells (MCF 7), prostate carcinoma cells (PC3), hepatoma cells (HepG2) and embryonic mouse fibroblasts (P6 and R-)

• Concentraciones

  ~15 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  All of the standards and experiments for Picropodophyllin (PPP) are performed in triplicates using the Cell proliferation kit II, which is based on colorimetric change of the yellow tetrazolium salt 2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide inner salt in orange formazan dye by the respiratory chain of viable cell.

• Modelos animales

  SCID mice bearing ES-1, BE, or PC3 xenografts that express IGF-1R, or R- v-src (IGF-1R negative) and P12 (overexpressing IGF-1 and IGF-1R)

• Dosificaciones

  20 mg/kg/12 h

• Administración

  i.p.