Por favor, indique su número de pedido en el correo electrónico. Nos esforzamos por responder a todas las consultas por correo electrónico en el plazo de un día hábil.
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline
Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.
30.000mg/ml
(68.66mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble. * Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes. * Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)
Preparación de soluciones madre
Actividad biológica
Descripción
PF-5274857 es un antagonista potente y selectivo de la Smoothened (Smo), inhibe la señalización Hedgehog (Hh) con IC50 y Ki de 5,8 nM y 4,6 nM, respectivamente, y este compuesto puede penetrar la barrera hematoencefálica.
Objetivos
Smoothened
Smoothened
4.6 nM(Ki)
5.8 nM
In vitro
PF-5274857 inhibe completamente la actividad de la vía Hh inducida por Shh con un IC50 de 2,7 nM, medido por la actividad transcripcional del gen Gli1, corriente abajo de Smo, en células MEF. El receptor μ-opioide es débilmente inhibido por este compuesto con una constante de disociación de 36 μM determinada posteriormente en un ensayo funcional.
In vivo
PF-5274857 muestra una inhibición significativa del crecimiento tumoral (TGI) dosis-dependiente e induce la regresión tumoral a dosis altas (>10 mg/kg). Este compuesto reduce la expresión génica de Gli1, Gli2, Ptch1 y Ptch2 en diversos grados, lográndose los efectos máximos entre 6 y 12 horas después de la dosis (Gli1 es el gen más sensible), mientras que tiene poco efecto sobre los niveles de Smo. En el tejido cutáneo, también se observa una reducción de Gli1 y Gli2 con una cinética similar por este compuesto químico. La concentración del fármaco derivada del modelo para la inhibición semimáxima de la tasa de producción de ARNm de Gli1 tumoral (IC50) por este compuesto se determina en 8,9 nM en ratones con aloinjertos de meduloblastoma Ptch+/−p53+/−, lo que corresponde matemáticamente a una regresión tumoral del 119% de TGI después de 6 días de exposición plasmática a esta concentración. En los ratones con aloinjertos de meduloblastoma Ptch+/−p53−/−, el valor de IC50 se estima en 3,5 nM, consistente con los resultados de Ptch+/−p53+/−. También es capaz de atravesar la barrera hematoencefálica en ratas dentro de las 4 horas posteriores a la dosis.
Las células HEK293 que sobreexpresan Smo humana (aminoácidos 181-787) se cultivan en medio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con 10% de FBS, Pen-Strep y 0,1 mg/mL de higromicina hasta una confluencia del 90%. Después de lavar con PBS frío de Dulbecco, el pellet celular se resuspende en tampón de preparación de membrana (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 250 mM sacarosa con cóctel de proteasas completo de Roche) y se homogeneiza. El homogeneizado se centrifuga y el pellet celular se resuspende en tampón de ensayo (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl2, 1 mM EDTA y 0,1% de albúmina sérica bovina libre de proteasas) y se homogeneiza en un triturador de tejido de vidrio. La proteína total en la preparación de membrana que contiene Smo se determina utilizando el ensayo de proteínas Pierce BCA. Para el ensayo de unión competitiva, se añaden 100 μL de tampón de ensayo a una placa de filtro GF/B de 96 pocillos durante 10 minutos para prehumedecer el filtro y luego se retiran. A continuación se añaden los siguientes reactivos: 20 μL de tampón de ensayo, 10 μL de diluciones en serie de este compuesto, 20 μL de antagonista de 3H-Smo (concentración final de 3 nM) y 50 μL de preparación de membrana (40 μg de proteína total). Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se lavan y se secan al vacío. A continuación, las placas se secan durante 1 hora en un horno a 60 °C antes de añadir 45 μL de Microscint 20 y se incuban a temperatura ambiente durante 30 minutos a 1 hora, para luego ser contadas en un contador de centelleo TopCount. Los datos se analizan utilizando el software GraphPad Prism.
Gli-Luc/MEF cells are grown in the knockout DMEM supplemented with 10% heat-inactive FBS, 2 mM l-glutamine, and 0.55 mM β-mercaptoethanol until 90% confluence. On day 1, cells are trypsinized and seeded into white 384-well plates in 20 μL per well of OptiMEM media that is supplemented with 1% heat-inactive FBS and 1 mM sodium pyruvate at a concentration of 7,500 cells per well. Plates are incubated at 37 °C and 5% CO2 overnight. On day 2, this compound is added to the cells at a final concentration ranging from 3 μM to 50 pM at a 3-fold serial dilution followed by addition of recombinant mouse Sonic Hedgehog to a final concentration of 2 μg/mL. The cells are incubated with this chemical and Shh for 48 hours at 37 °C and 5% CO2. Luciferase assays are conducted on day 4 using the Bright-Glo Luciferase Assay System. Briefly, Bright-Glo luciferase reagent (25 μL) is added to each well of the 384-well plate containing media. Plates are kept at room temperature for 5 minutes and then read on a Luminescence plate reader. The IC50 value of this compound is calculated.
POLÍTICA DE DEVOLUCIÓN
La Política de Devolución Incondicional de Selleck Chemical garantiza una experiencia de compra en línea fluida para nuestros clientes. Si no está satisfecho con su compra de alguna manera, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 7 días posteriores a su recepción. En caso de problemas de calidad del producto, ya sean problemas relacionados con el protocolo o con el producto, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 365 días a partir de la fecha de compra original. Siga las instrucciones a continuación al devolver productos.
ENVÍO Y ALMACENAMIENTO
Los productos Selleck se transportan a temperatura ambiente. Si recibe el producto a temperatura ambiente, tenga la seguridad de que el Departamento de Inspección de Calidad de Selleck ha realizado experimentos para verificar que la colocación a temperatura normal durante un mes no afectará la actividad biológica de los productos en polvo. Después de la recogida, guarde el producto de acuerdo con los requisitos descritos en la hoja de datos. La mayoría de los productos Selleck son estables en las condiciones recomendadas.
NO PARA USO HUMANO, DIAGNÓSTICO VETERINARIO O TERAPÉUTICO.
