PF-477736

PF-477736 (128 nM) anula el punto de control de daño del ADN inducido por camptotecina de manera dosis-dependiente en células CA46 y HeLa. Este compuesto anula eficazmente el arresto de la fase S inducido por con un aumento correspondiente en las poblaciones de células apoptóticas en células HT29. Esta sustancia química (540 nM) mejora la citotoxicidad inducida por de manera dependiente del tiempo y la dosis en células HT29. Potencia la actividad inhibidora del crecimiento de un panel de agentes quimioterapéuticos en un amplio espectro de líneas celulares de cáncer humano deficientes en p53 en el ensayo MTT. La adición de este compuesto (360 nM) a las células arrestadas por induce un aumento dramático en la intensidad de la fosforilación de H2AX, lo que refleja un mayor número de moléculas de γ-H2AX cerca de los sitios de daño del ADN. [1] Esta sustancia química (0,5 nM) bloquea selectivamente la fosforilación de p73 y P53 en presencia de curcumina en células HL-60. [2] Este (360 nM) suprime la fosforilación de la histona H3 (Ser10) y Cdc25C (Ser216) inducida por y potencia la apoptosis en células COLO205. [3] Este compuesto (250 nM) combinado con MK-1775 tiene una marcada actividad citotóxica sinérgica en células OVCAR-5. Este (250 nM) combinado con MK-1775 provoca la acumulación de células con un contenido de ADN entre 2N y 4N en células OVCAR-5. Esta sustancia química (250 nM) combinada con MK-1775 provoca una mitosis prematura antes del final de la replicación del ADN, con ADN dañado que conduce a la muerte celular apoptótica en células OVCAR-5. [4]

PF-477736 (4 mg/kg i.v.) da como resultado una vida media terminal (T1/2) de 2,9 horas, un AUC de 5,72 μg×hr/mL y un CLp de 11,8 mL/min/kg en ratas. Este compuesto mejora la actividad antitumoral de una dosis máxima tolerada de manera dosis-dependiente en el modelo de xenoinjerto de ratón Colo205. Esta sustancia química (12 mg/kg) induce un aumento en la fosforilación de la histona H3 (Ser10) y de la fosfo-histona H2AX en el modelo de xenoinjerto de ratón Colo205. [1] Este compuesto (15 mg/kg i.p.) mejora la inhibición del crecimiento tumoral inducida y el retraso del crecimiento tumoral en los modelos de xenoinjerto COLO205 y MDA-MB-231. [3] Esta sustancia química (10 mg/kg una vez al día i.p.) combinada con MK-1775 (30 mg/kg dos veces al día oral) conduce a una mayor inhibición del crecimiento tumoral en ratones portadores de xenoinjertos OVCAR-5. [4]

• Ensayo de unión

  El ensayo se realiza en una placa de 96 pocillos durante 20 minutos a 30℃ en 0,1 mL de tampón de ensayo que contiene 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 unidades de lactato deshidrogenasa/mL, 16 unidades de piruvato quinasa/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP y 25 mM de cloruro de magnesio. Los ensayos se inician con 1 nM del dominio quinasa CHK1. La inhibición de la actividad de CHK1 se determina midiendo las velocidades iniciales en presencia de concentraciones variables de este compuesto. Los datos se analizan utilizando el software Enzyme Kinetic y Excel y se ajustan a un modelo cinético de inhibición competitiva para obtener un valor de Ki. La selectividad quinasa de este químico se evalúa mediante un cribado a 1 μM o 10 μM frente a un panel de aproximadamente 100 proteínas quinasas.

• Líneas celulares

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• Concentraciones

  ~1 μM

• Tiempo de incubación

  96 hours

• Método

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• Modelos animales

  Colo205 xenograft mouse model

• Dosificaciones

  40 mg/kg

• Administración

  intravenous injection